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目的：卵巢癌是妇科最常见的恶性肿瘤，为妇科恶性肿瘤的首要死亡原因。由于卵巢癌早期症状隐匿，75%的病人在确诊时已为晚期。目前临床上卵巢癌的治疗方法，是卵巢肿瘤细胞减灭术及术后铂类为基础的联合化疗。卵巢癌的5年生存率仍徘徊在30%左右。对化疗药物耐药是卵巢癌患者预后差，死亡率高的重要原因之一，其中以铂类耐药最为常见。铂类耐药对于卵巢癌患者的治疗非常棘手。因此，现在急需探究改善卵巢癌细胞对铂类药物耐药的机制，籍以研发新的抗癌药物。Hsp90是人体内一种必不可少的分子伴侣蛋白，可通过对其下游近150余种信号蛋白的调节，调控着细胞周期，肿瘤的发生及细胞的凋亡[10]。所以抑制hsp90的功能，导致其不能与客户蛋白正常结合，并诱导其底物的降解，阻断细胞信号传导，可以达到抑制肿瘤细胞生长的作用。17-二甲基胺乙基-17-去甲氧基格尔德霉素（17-DMAG）是一种特异性的Hsp90抑制剂。有研究表明，17-DMAG通过抑制Hsp90的功能，使survivin，livin的表达下调，同时通过诱导STAT信号的传导及突变p53诱导胃癌细胞凋亡[6]。Jhaveri K的研究表明17-DMAG对卵巢癌，宫颈癌，乳腺癌细胞均有明显的增殖抑制作用[28]。相关研究表明17-DMAG不能下调hsp90的水平，但是可引起AKT，Met及HER-2在卵巢癌细胞中的下降[29][30]。17-DMAG对顺铂耐药的卵巢癌细胞的抑制作用及相关机制尚无研究。本研究旨在探讨17-DMAG与顺铂联合应用对人卵巢癌细胞株SKOV3及对顺铂耐药的卵巢癌细胞株SKOV3/DDP耐药性的影响及其相关机制，为卵巢癌耐药机制提供基础理论依据。方法：1MTT法检测17-DMAG（1，2，4，8，16，32μmol/L），顺铂(1，2，4，8,16μg/mL)和17-DMAG与顺铂联合作用对SKOV3及对SKOV3/DDP的增殖抑制作用，并计算17-DMAG联合顺铂应用逆转顺铂耐药的耐药倍数RF。2FCM法测定顺铂，17-DMAG及17-DMAG联合顺铂处理SKOV3及SKOV3/DDP后的凋亡率，并通过金氏公式计算两药联合作用时的相互作用指数q值。3RT-PCR法检测顺铂，17-DMAG及17-DMAG联合顺铂处理SKOV3和SKOV3/DDP细胞前，后基因hsp90α，p53，bcl-2和survivin基因的表达情况。4Western-blot法检测顺铂，17-DMAG及17-DMAG联合顺铂处理SKOV3和SKOV3/DDP细胞前、后细胞内hsp90α，p53，bcl-2和survivin蛋白的表达情况。结果：117-DMAG（1，2，4，8，16，32μmol/L）对SKOV3及SKOV3/DDP细胞有显著的增殖抑制作用，但是，17-DMAG对这两种细胞的增殖抑制作用无明显差别（P>0.05）；并且随着17-DMAG用药浓度的增加，作用时间的延长，其对SKOV3及SKOV3/DDP的增殖抑制作用增强，呈时间剂量依赖性。不同浓度顺铂(1，2，4，8，16μg/mL)分别处理SKOV3及SKOV3/DDP细胞24h，48h，72h后，对这两种卵巢癌细胞的增殖抑制作用呈一定的剂量-时间依赖关系，顺铂对SKOV3细胞的抑制作用较SKOV3/DDP细胞明显。17-DMAG联合顺铂对SKOV3及SKOV3/DDP细胞有明显的增殖抑制作用，呈剂量-时间依赖性。而且，17-DMAG联合顺铂逆转顺铂的耐药倍数为2.19，表明17-DMAG可逆转顺铂的耐药性。2通过FCM法测得以下药物处理浓度时的凋亡率，SKOV3细胞：空白对照组，6μmol/L17-DMAG单药组，1.5μg/mL顺铂单药组，17-DMAG与顺铂联用组：6μmol/L17-DMAG+1.5μg/mL顺铂。SKOV3/DDP细胞：对照组，17-DMAG单药组6μmol/L，细胞顺铂单药组3μg/mL，17-DMAG与顺铂联用组：17-DMAG6μmol/L+顺铂3μg/mL。采用金氏公式计算得在skov3细胞两药联合作用时的相互作用指数q=0.941，在SKOV3/DDP细胞两药联合作用时的相互作用指数q=0.999，均高于0.85.说明17-DMAG和顺铂两药联合应用对SKOV3细胞及SKOV3/DDP细胞有协同的增殖抑制效应。3经过17-DMAG和顺铂两药单独或联合处理48h后，采用RT-PCR法检测SKOV3和SKOV3/DDP细胞中hsp90α，p53，bcl-2和survivinmRNA的表达变化，结果显示：hsp90α在经过17-DMAG及顺铂作用后，其含量与对照组比较无明显差异（P>0.05）。顺铂作用于SKOV3及SKOV3/DDP细胞48h后，各组的p53，bcl-2和survivin表达均明显上升，与空白对照组相比差异有显著性（P<0.05），17-DMAG单药及17-DMAG与顺铂联合应用可下调p53，bcl-2和survivin基因的表达，与空白对照组相比差异有显著性（P<0.05），且17-DMAG联合顺铂组p53，bcl-2和survivin的下调与单药17-DMAG组相比无显著性差异（P<0.05）。及SKOV3/DDP细胞空白对照组p53，bcl-2和survivin mRNA水平高于SKOV3细胞，差异有统计学意义（P<0.05）。4Western-blot法检测hsp90α，p53，bcl-2和survivin蛋白在SKOV3和SKOV3/DDP细胞中的变化，结果显示：SKOV3和SKOV3/DDP细胞经过17-DMAG及顺铂作用后，hsp90α，bcl-2和survivin蛋白的表达含量与对照组相比无明显差异（P>0.05）；SKOV3及SKOV3/DDP细胞经顺铂作用48h后，两组的p53蛋白表达增加，与对照组比有显著性差异（P<0.05），17-DMAG单药组及17-DMAG联合顺铂组均下调p53蛋白的表达，与空白对照组相比有显著差异（P<0.05），但是17-DMAG单药组下调p53蛋白的表达与17-DMAG同顺铂联用组相比无显著性差异（P>0.05）。SKOV3及SKOV3/DDP细胞空白对照组间p53，bcl-2和survivin蛋白水平相比较，具有统计学意义（P<0.05）。结论：117-DMAG联合顺铂对卵巢癌细胞SKOV3和SKOV3/DDP细胞均有明显的增殖抑制作用，且呈时间剂量依赖性。17-DMAG与顺铂联合应用对两种卵巢癌细胞的增殖抑制作用均明显强于17-DMAG及顺铂的单独使用。217-DMAG联合顺铂可下调SKOV3和SKOV3/DDP细胞中耐药基因p53，bcl-2和survivin mRNA在的表达。17-DMAG联合顺铂可下调耐药基因p53蛋白在SKOV3和SKOV3/DDP细胞中的表达，因此，我们认为17-DMAG可能通过下调卵巢癌SKOV3/DDP细胞中的p53基因和蛋白的表达而改变卵巢癌细胞对顺铂的耐药性。17-DMAG在一定程度上可显著逆转DDP的耐药性。