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本研究用两台高效液相色谱仪和一六通阀建立了一套在线柱切换HPLC系统,并将其应用于食品中纽甜和维生素B12的测定,研究内容分为两部分。第一部分:饮料、蜜饯、糕点中纽甜的柱切换HPLC法测定饮料、蜜饯和糕点中的纽甜用水超声提取后,置离心机中离心(5000转/min)5min,沉淀用20%甲醇溶液洗涤三次(糕点用50%甲醇洗涤),合并沉淀后的上清液经滤纸过滤后,过Waters HLB(6cc)固相萃取柱,以2ml 60%甲醇溶液洗涤、3ml甲醇洗脱。洗脱液经反相C18色谱柱-反相C18色谱柱(以乙腈、水和0.5%磷酸为流动相等度洗脱)分离,光电二极管阵列检测器测定纽甜的含量。以6种不同浓度的标准纽甜溶液进样获得的回归方程的回归系数为0.9999。同一样品处理液测定五次的结果计算获得的相对标准偏差为4.7%,处理液在1天内稳定,符合测定要求。方法的检出限为40μg/kg,样品三种加标水平的加标回收率结果均高于80%。本方法简便、结果可靠,可用于饮料和蜜饯和糕点食品中纽甜的测定。第二部分:保健食品和婴幼儿配方食品中维生素B12的柱切换HPLC法测定婴幼儿配方食品中的维生素B12有以添加的氰钴胺素和天然存在的甲基钴胺素等形式,需先统一转化为氰钴胺素进行测定。用0.1mol/L的乙酸钠缓冲溶液(pH4-5)提取(加入高峰淀粉酶和胃蛋白酶将淀粉和蛋白质水解释放结合型维生素B12),并在105℃下与氰化钾反应至少1小时,将其它类型的钴胺素转变为氰钴胺素。定容的提取液经Whatman 2V滤纸过滤后,过Alltech C8固相萃取柱,用5ml水和5ml 5%乙腈淋洗后用5ml 30%乙腈溶液洗脱,洗脱液氮吹干后定容至1ml。保健食品中的维生素B12用甲醇提取三次,合并提取液经水浴蒸干后用定容至5ml。处理后的试样经尺寸排阻柱预分离后,转入反相C18柱继续分离(乙腈/水作流动相梯度洗脱),经PDA检测器测定。由6种不同浓度的维生素B12标准溶液进样测定结果获得的标准曲线线性良好,回归系数为0.9996。由同一样品平行测定六份获得的重复性良好(RSD分别为4.7%和8.4%),各类样品三种不同浓度加标的加标回收率高于80%。与微生物法相比,本方法准确、检测时间短,可用于保健食品和婴幼儿配方食品中的维生素B12的测定。