放线菌A2菌株发酵条件优化及发酵液中抑菌活性成分研究

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A2菌株是西北农林科技大学农药研究所从渤海海水中分离到一株放线菌(编号A2),其发酵产物对多种植物病原菌和细菌具有强烈的抑制作用,本文对A2菌株发酵条件,活性成分的分离及结构鉴定进行了初步的研究。主要研究结果如下:(1)初步研究了A2菌株的发酵条件,确定了最佳培养基和培养条件。单因子发酵实验和正交实验表明:碳源以1%玉米粉和1%葡萄糖最佳,氮源以0.3%蛋白胨最好,接种量以8%为宜,转速为:180rpm,最佳发酵培养时间为120h,发酵温度:28℃,装液量为60ml/250ml。(2)采用大孔树脂吸附法,离子交换树脂法及经典的纸层析法初步将抑菌活性成分定性为碱性水溶性抗生素。经茚三酮薄层显色呈阳性反应,表明活性成分含有氨基。由此可以初步推测活性化合物为氨基糖苷类抗生素。(3)采用724弱酸性阳离子交换树脂、醇沉、凝胶、CM-Sephadex-C25凝胶层析、离子对液相色谱制备等分离手段对活性组分进行了初步的分离,得到H2,H3及H4三个活性化合物,鉴定H2,H4的结构分别为链丝菌素D和链丝菌素F。(4)3个化合物对对番茄灰霉病,菌玉米大斑病菌,马铃薯干腐病菌EC50均在100μg/ml以下;其中H4对番茄灰霉病的活性最高, EC50值为56.99μg/ml。在50μg/ml浓度下,对大肠杆菌,蜡状芽孢杆菌,枯草芽孢杆菌,金黄色葡萄球菌,绿脓杆菌下的抑菌圈直径均达7mm(++)以上。
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