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目的通过研究IL-17/IL-17R激活JAK2/STAT3信号通路调控肝癌细胞自噬进而抑制化疗诱导的凋亡敏感性,从而探讨IL-17/IL-17R在肝癌化疗耐受中的作用及其机制。方法选取临床确诊的30例肝癌患者,ELISA方法检测奥沙利铂作用前后血清中IL-17的水平;同时选取30例健康体检者ELISA检测血清IL-17水平作为对照。体外培养肝癌细胞(SMMC-7721)和正常肝细胞(L02),检测细胞中IL-17R的表达水平。MTT法筛选奥沙利铂作用肝癌细胞的IC50,以此条件作用肝癌细胞后,提取蛋白,用western blot检测细胞中IL-17R及凋亡相关蛋白的表达情况、自噬相关蛋白Beclin-1和Lc3的表达情况以及JAK2/STAT3信号通路中p-jak2,pstat3表达水平。AG490抑制JAK2/STAT3和PI3K/AKT信号通路后western blot检测细胞凋亡及细胞自噬情况;LY294002抑制PI3K/AKT通路后western blot检测细胞自噬水平,以明确PI3K/AKT通路对JAK2/STAT3信号通路的调控作用。加入IL-17(200ng/ml)作用肝癌细胞1h后,以奥沙利铂继续作用,western blot检测细胞凋亡、细胞自噬及JAK2/STAT3信号通路活化情况。特异性中和抗体阻断及小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)干扰肝癌细胞中IL-17R表达后,western blot检测肝癌细胞凋亡、自噬水平变化及JAK2/STAT3信号通路活化情况。三甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)阻断细胞自噬,western blot检测奥沙利铂诱导的细胞凋亡情况;同时加入IL-17或阻断其信号通路后检测细胞的凋亡变化情况。用Image Lab凝胶成像分析系统分析图像,excel和SPSS17.0整理和分析数据,两组间比较用独立样本t检验,多组间比较用单因素方差分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果1化疗后的肝癌患者血清中IL-17的浓度(142.41±33.25)pg/ml明显高于化疗前(77.36±22.90)pg/ml及健康体检者(26.65±4.92)pg/ml,(P<0.05)。SMMC-7721细胞化疗前后均明显表达IL-17R,且化疗后IL-17R水平明显高于化疗前。2加入IL-17及阻断/干扰IL-17R试验表明升高的IL-17/IL-17R引起化疗时肝癌细胞中Bcl-2蛋白表达增加,而Bax、Cleaved-caspase3蛋白表达减少,从而使细胞凋亡减少。3化疗后SMMC-7721细胞中自噬相关蛋白Beclin-1和Lc3Ⅱ表达增加,且升高IL-17水平可以上调自噬水平,而阻断/干扰IL-17R则下调自噬水平。4 IL-17可促进JAK2/STAT3的磷酸化激活,而阻断/干扰IL-17R后,JAK2/STAT3不被激活。特异性阻断PI3K-AKT和JAK2/STAT3信号通路后,肝癌细胞中自噬水平均明显降低,其中JAK2/STAT3信号通路在调控化疗时肝癌细胞的自噬中发挥着主要作用。5用3-MA抑制自噬后,IL-17水平对化疗后细胞的凋亡水平无影响。结论1肝癌细胞化疗后细胞内IL-17/IL-17R高表达。2 IL-17/IL-17R通过活化JAK2/STAT3信号通路诱导肝癌细胞发生自噬。3 IL-17/IL-17R-JAK2/STAT3信号通路下调肝癌细胞化疗凋亡敏感性,最终导致肝癌化疗时耐药现象的发生。