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恒定链Ii(invariant chain)是一种非多态性的II型跨膜糖蛋白，由胞浆区、跨膜区和内质网腔区三部分组成。恒定链在脊椎动物中作为MHCII类分子成熟的分子伴侣,在协助MHCII分子递呈抗原过程中起重要作用。恒定链基因属单拷贝基因，但存在异构体形式。恒定链上有许多功能活性片段，如胞浆区的两个亮氨酸基序具有内体定位功能，跨膜区的序列参与膜的锚定和促进三聚化的形成，内质网腔区的CLIP能占居MHCII类分子的肽结合槽，阻止内源性抗原肽的结合。三聚化区形成三聚体与MHCII类分子结合，作为其装配的支架，CLIP区前还有促进抗原肽加载到肽结合槽的Ii-key基序。越来越多的研究证明Ii是一个多功能分子，如Ii与MHCI类分子，与新生儿Fc γ受体和与血管紧张素II受体的相互作用被发现；除在免疫调节中的作用外，还在应用研究有所发现，如利用Ii的内体定向作用作为抗原的载体，用优势的抗原表位置换Ii的CLIP区，利用外加CLIP来增强免疫应答，利用Ii的抑制和Ii的沉默技术。目前有两种机制能解释Ii调节抗原肽加载到MHCII分子上的功能：首先，Ii被降解留下CLIP区结合在抗原肽结合槽中，DM再解离CLIP而与抗原肽交换；再次，在CLIP区上游有一段序列，与MHCII分子上称为别构位点的部位结合，使抗原肽结合槽保持开放直到新抗原肽结合在抗原肽结合槽里，这段序列称为Ii-key；美国antigen express公司将Ii-key与抗原表位通过连接臂相连形成Ii-key嵌合肽疫苗与单独用表位免疫获得了显著的免疫增强效果。新城疫病毒可引起禽类发病，一旦染病会给养鸡业造成巨大的损失。融合蛋白是NDV表面一种重要的囊膜蛋白，在NDV病毒免疫中扮演重要的角色，实验室成员已将NDV F48E9强毒株融合蛋白上三个潜在的抗原表位串联成F306，其免疫原性得到增强，但多肽疫苗的应用受到MHC限制性，抗原性弱，表位置换难，持续时间短等限制，有必要对F306进行改造。随着鸡，鸭，鹅，鹌鹑等禽类Ii基因的克隆，通过序列比对在Ii中发现了一些保守序列，如与鼠和人Ii-key（LRMK）相似的序列(LQRK),我们称为禽类Ii-key；为研究禽类Ii-key（LQRK）是否具有免疫增强作用，以及鸡恒定链的其它片段的功能，我们用恒定链上部分片段对取自新城疫病毒（NDV）融合蛋白（F蛋白）的串联表位F306进行修饰，为进一步比较经鸡恒定链部分功能片段修饰的表位与未经修饰表位免疫效果奠定基础。首先，将鸡Ii-key的四肽（LQRK）、二肽（AP）的DNA序列设计到引物上，以pGEX-4T-1/F306为模板， PCR扩增获Ii-key/F306、Ii-key/F306/AP片段，插入到质粒pET-32a，而得pET-32a/Ii-key/F306、pET-32a/Ii-key/F306/AP重组质粒。应用添加互补性酶切位点的基因工程方法，使胞浆区（Cyt）前19个氨基酸片段与Ii-key/F306、 Ii-key/F306/AP拼接，得到pET-32a/Cyt/Ii-key/F306、pET-32a/Cyt/Ii-key/F306/AP重组质粒，将各质粒转化进宿主菌，诱导表达，从PAGE胶中纯化重组蛋白。进一步将构建的五个重组原核表达质粒进行表达并纯化了带HIS标签的F306、Ii-key/F306、Ii-key/F306/AP、Cyt/Ii-key/F306、Cyt/Ii-key/F306/AP五个蛋白，纯度高达95%以上。本研究所构建的修饰表位可通过原核表达大量制备，切胶纯化蛋白纯度高，为动物免疫试验奠定了物质基础。