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恶性肿瘤是严重威胁人类生命安全的疾病之一。寻求高效低毒的抗肿瘤药物及治疗方法一直是科学界研究的热点。蝎毒是一种生物毒素,因其具有广泛的生理学效应而倍受关注。本文旨在研究蝎毒对体外培养的人肝癌细胞(SMMC 7721)以及Hela细胞株的杀伤作用,并对其作用机制进行探讨,将为抗肿瘤药物的开发及蝎毒抗肿瘤的临床应用提供实验依据。目的:检测蝎毒粗毒及其部分纯化组分对人肝癌细胞(SMMC 7721)以及Hela细胞株生长的抑制作用;对两种细胞株凋亡相关蛋白进行检测,以探讨蝎毒对其作用机制;验证两种肿瘤细胞对于蝎毒的敏感性。方法:分别用蝎毒粗毒以及蝎毒部分纯化组分按照浓度梯度对人肝癌细胞(SMMC 7721)以及Hela细胞作用24小时,然后用MTT法检测两种肿瘤细胞对蝎毒粗毒以及部分纯化组分的存活率;分别用Western Blotting以及免疫细胞化学的方法检测caspase-3以及bcl-2两种凋亡相关蛋白在蛋白水平的表达量。Western Blotting以Actin作为内参。用免疫荧光的方法验证两种肿瘤细胞对于蝎毒的敏感性。结果:1 MTT结果:(1.1)经蝎毒粗毒处理24小时,粗毒组人肝癌细胞(SMMC 7721)的存活率明显低于对照组(P<0.05),并随着蝎毒粗毒浓度增大(0.28、0.70、1.4、2.8及5.6μg/ml),作用时间延长(4h、8h、12h、24h),肝癌细胞存活率逐渐降低,呈梯度变化。(1.2)经蝎毒部分纯化组分处理24小时,纯化组人肝癌细胞(SMMC 7721)的存活率明显低于对照组(P<0.05),并随着蝎毒浓度增大(0.28、0.70、1.4、2.8及5.6μg/ml),作用时间延长(4h、8h、12h、24h),肝癌细胞存活率逐渐降低,呈梯度变化。(1.3)蝎毒部分纯化组分对于人肝癌细胞(SMMC 7721)的杀伤作用稍弱于粗毒组。(2.1)经蝎毒粗毒处理24小时,粗毒组Hela细胞的存活率在蝎毒浓度为0.28、0.70、1.4μg/ml时,与对照组无明显差异;在蝎毒浓度为2.8及5.6μg/ml时,低于对照组(P<0.05),并随着作用时间延长(4h、8h、12h、24h),在8小时后逐渐降低,呈梯度变化。(2.2)经蝎毒部分纯化组分(浓度为0.28、0.70、1.4、2.8及5.6μg/ml)处理的Hela细胞的存活率在24小时内,与对照组无明显差异。(2.3)Hela细胞对于蝎毒粗毒及其部分纯化产物的敏感性低于人肝癌细胞(SMMC 7721)。2 Western blotting结果:经过2.8μg/ml蝎毒粗毒处理4小时的人肝癌细胞(SMMC 7721),促凋亡蛋白caspase-3的蛋白表达量增加;抑制凋亡蛋白bcl-2的蛋白表达量减少。3免疫细胞化学结果:经过2.8μg/ml蝎毒粗毒处理8小时的Hela细胞,促凋亡蛋白caspase-3的蛋白表达量增加;抑制凋亡蛋白bcl-2的蛋白表达量减少。4免疫荧光结果:经过标记荧光的蝎毒粗毒处理8小时的人肝癌细胞(SMMC 7721)以及Hela细胞,荧光显微镜下可见,人肝癌细胞(SMMC 7721)结合的荧光物质多于Hela细胞。结论:1.蝎毒粗毒及其部分纯化组分对人肝癌细胞(SMMC 7721)的生长具有明显的抑制作用。24小时内,随着蝎毒浓度增大(0.28、0.70、1.4、2.8及5.6μg/ml),作用时间延长(4h、8h、12h、24h),存活率逐渐降低。粗毒纯化物虽然分子量相对单一,但对人肝癌细胞(SMMC 7721)的杀伤作用稍弱于粗毒。2.当蝎毒粗毒浓度为2.8及5.6μg/ml,处理时间大于8小时,Hela细胞的存活率逐渐下降,但对蝎毒的敏感性显著低于SMMC 7721。3.可初步认为蝎毒抑制人肝癌细胞(SMMC 7721)以及Hela细胞的生长可能是通过诱导细胞发生凋亡来实现的。