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目的：分析耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(carbapenem-resistant Acinetobacter 6aumannii,CRAB)的分子特征并评价替加环素联合头孢哌酮/舒巴坦对CRAB的体外、体内及细胞内活性。方法：(1)应用RT-PCR检测我院临床分离的非重复87株CRAB携带blaTEM, blaGES,blaSHV, blaKPC,blnCTX-M-1,blaVIM-1,blaVIM-2,blaIMP-1,blaIMP-2,blanSIM-1, blaNDM-1,blaOXA-23-like,blaOXA-24-like,blaOXA-51-like,blaOXA-58-like等15个碳青霉烯酶耐药基因情况并测序。(2)应用微量肉汤稀释法测定联合抑菌指数(FICI),应用时间—杀菌曲线评价替加环素、头孢哌酮/舒巴坦及联合用药的体外效果。(3)C57BL/6小鼠腹腔内注射最低致死剂量的CRAB建立腹膜炎/脓毒症小鼠模型,分析给药4h和18h小鼠血、肺、肝、脾、肾各脏器菌落数并观察病理。 (4)建立细胞内感染鲍曼不动杆菌模型：小鼠单核巨噬细胞RAW264.7与CRAB孵育4h,庆大霉素清除细胞外细菌,细胞培养24h。电镜观察细胞吞噬细菌及细胞内细菌的状态。评价各抗菌药物的细胞内外抑菌浓度(bacteriostatic concentrations,Cs)和最大相对效应(maximalrelative efficacies,Emax),并绘制量效曲线和时间—杀菌曲线。结果：(1)87株CRAB共携带4种碳青霉烯酶基因：blaOXA-51-like(97.7%), blaOXA-23-like(95.4%),blaTEM(85.1%)和blaOXA-58-like(2.3%)。耐药模式最多为：blaTEM+blaOXA-23+blaOXA-51-like(83.9%).(2)单药时：替加环素MIC<Cmax的CRAB比例为57.5%,头孢哌酮/舒巴坦敏感率为12.6%。两药联合时,替加环素MIC<Cmax的比例为96.6%,头孢哌酮/舒巴坦的敏感率为44.8%。联合抑菌指数(FICI)≤0.5的比例为25.3%。时间—杀菌曲线：1/2×MIC和1 ×MIC的联合用药在AB-8, AB-14, AB-44菌株呈协同作用,并能清除肉汤中的细菌,但替加环素联合等剂量的舒巴坦却在24 h后出现了细菌的再生长。(3)腹膜炎/脓毒症小鼠死亡率：替加环素单药和联合用药较模型组(0% VS 100%,P<0.05)和头孢哌酮/舒巴坦单药组(0% VS 50%,P<0.05)明显下降。肺、肝、脾、肾等组织病理炎症明显减轻。给药4 h：替加环素与联合用药组各脏器的菌落数均较模型组及头孢哌酮/舒巴坦组减少(替加环素：血5.64±0.16log10 CFU/mL,肺5.73±0.091og10CFU/g,肝6.34±0.17log10 CFU/g,脾7.11±0.17log10 CFU/g,肾5.98±0.13log10 CFU/g;联合用药组：血5.13±0.20log10 CFU/mL,肺5.09±0.06log10 CFU/g,肝5.81±0.16log10 CFU/g,脾7.17±0.09log10 CFU/g,肾5.71±0.18log10 CFU/g;模型组：血7.18±0.27 log10 CFU/mL,肺7.19±0.31log10CFU/g,肝8.11±0.21log10CFU/g,脾8.16±0.26log10 CFU/g,肾7.67±0.31log10 CFU/g;头孢哌酮/舒巴坦组：血6.27±0.26log10 CFU/mL,肺6.21±0.37log10 CFU/g,肝7.01±0.17log10 CFU/g,脾7.92±0.15log10 CFU/g,肾6.87±0.31logl0 CFU/g) (P<0.05);联合用药与替加环素单药相比,肺、肝菌落数明显下降(-0.63±0.11log10 CFU/g,-0.53±0.231og10 CFU/g) (P<0.05)替加环素联合头孢哌酮/舒巴坦与替加环素联合等剂量的舒巴坦比较,作用4h各脏器的菌落数差异无统计学意义,但作用18h前者肝脏的菌落数明显下降(4.40±0.17log10 CFU/g VS4.86±0.121og10CFU/g, P<0.05).(4)透射电镜观察到细菌在RAW264.7细胞液泡中复制。头孢哌酮/舒巴坦作用6h时并不能抑制细胞内细菌的生长,但是延长至24 h,可抑制细胞内细菌生长；而替加环素作用6h即能抑制细胞内细菌生长；联合用药细胞内的时间—杀菌曲线与替加环素单药基本重合。头孢哌酮/舒巴坦的抑菌浓度(Cs)在细胞内外基本都在MIC值附近,而替加环素细胞内Cs仅为细胞外的1/10×MIC。替加环素细胞内最大相对效应(Emax)为-2.37log10CFU/mgprot;头孢哌酮/舒巴坦细胞内Emax为-1.53 log10CFU/mg prot。结论：(1)本实验分离的CRAB主要携带blaoxA-51-like, blaOXA-23-like, blaTEM和blaoxA-58-like四种基因。(2)替加环素联合头孢哌酮/舒巴坦较单药或替加环素联合等剂量舒巴坦对体外、体内的CRAB有更好的抗菌活性。(3)替加环素对细胞内的CRAB有很好的活性；两药的联合在细胞内未表现出更优于替加环素的作用；无论单用或联合,这两种抗菌药物都不能彻底地清除细胞内的鲍曼不动杆菌。