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目的:应用siRNA干扰技术沉默Cdc25C基因,研究Cdc25C表达下调对肝癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响,并探讨Cdc25C在肝癌发展中的作用机制。方法:(1)通过RT-PCR法确定Cdc25C表达于小鼠肝癌Hepa1-6细胞系;(2)将带有FAM荧光标记的特异性Cdc25C干扰序列(siRNA)转染至Hepa1-6细胞中,以构建Cdc25C基因低表达的肝癌细胞。干扰实验设空白对照组(未转染)、阴性对照组(siRNA干扰空载体)以及实验组(siRNA-Cdc25C-1、siRNA-Cdc25C-2 和 siRNA-Cdc25C-3 干扰序列),并将各组细胞进行瞬时转染。通过荧光显微镜术和RT-PCR法,筛选最佳转染条件。运用qPCR法和Western blot法分别检测转染前后Hepal-6细胞中Cdc25C基因和蛋白的表达,确定最佳干扰序列。(3)通过CCK-8法和细胞划痕修复实验观察Cdc25C表达下调对Hepa1-6细胞增殖及迁移能力的影响。(4)通过流式细胞术检测Cdc25C表达下调对Hepa1-6细胞周期和凋亡的影响。(5)通过qPCR技术,检测转染前后各组肝癌细胞中内质网应激反应标志物葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、未折叠蛋白质反应标志物X-盒结合蛋白(XBP-1)和内质网应激特异性转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达水平变化。结果:(1)通过观察琼脂糖凝胶电泳显示,目的基因Cdc25C在小鼠肝癌Hepa1-6细胞中呈现阳性表达,经测序基因序列正确。(2)通过荧光显微镜下观察和RT-PCR法检测发现,以“30+1.5”稀释比例的siRNA+Lipo2000液的转染效率最高,且最佳干扰时间为24h。qPCR法和Western blot法检测结果显示,实验组Cdc25C基因和蛋白表达相比对照组明显减少,且在siRNA-Cdc25C-1组中表达最低(P<0.01);(3)通过CCK-8法检测,发现降低细胞中Cdc25C的表达后细胞的存活率与对照组比较明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);细胞划痕修复实验结果显示,Cdc25C表达下调后实验组细胞的修复率明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);(4)流式细胞术检测结果显示,Cdc25C表达下调后细胞周期DNA合成期(S期)增多,DNA合成后期及细胞分裂期(G2/M期)减少;且降低Cdc25C表达后实验组细胞凋亡所占百分比明显增多,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。(5)通过qPCR检测结果还发现,干扰细胞中Cdc25C的表达后,实验组细胞中内质网应激反应的相关分子GRP78、XBP-1和CHOP的表达量相比对照组均明显增多,且差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:下调Cdc25C基因的表达可抑制肝癌细胞增殖和促进肝癌细胞凋亡,其机制可能与肝癌细胞中Cdc25C表达下调后诱发内质网应激反应有关。