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多年生黑麦草是优质的草坪草,利用基因工程进行遗传改良的研究一直备受人们关注。我们在建立了高效的多年生黑麦草组培再生体系的基础上,通过基因枪法转化P5CS基因,获得了多年生黑麦草的新品系,为培育抗旱、耐盐草坪型黑麦草提供了新种质。主要结果如下:1.建立了多年生黑麦草两种外植体的再生体系 经过对比试验,筛选出适合于黑麦草成熟胚为外植体的再生培养基配方,愈伤诱导培养基MS + 2,4-D 5mg/L + mannitol 0.2mol/L为最佳,分化培养基为1/2MS培养基(大量减半)+ 2,4-D 1mg/L + KT 1mg/L,分化率为71%。并对影响其再生频率因素作了初步分析。种子浸泡时间越短,胚乳越少越有利于愈伤组织的诱导。幼穗愈伤诱导和分化培养基均为MS+2,4-D 3mg/L +6-BA 0.5mg/L + sucrose 3%,成功地建立了再生体系,愈伤诱导和分化率分别为80%和81%。取材时间对愈伤诱导影响不大,拓展了转化外植体的取材范围。2.初步建立了多年生黑麦草的遗传转化体系(1) 对愈伤组织进行除草剂Glufosinate的敏感性试验,确定了两轮筛选阶段的选择压的浓度,分别为1.2mg/L和1.7mg/L。(2) 以成熟胚为外植体建立多年生黑麦草的遗传转化体系 以一个月左右的愈作组织为转化受体,经基因枪轰击后恢复培养7天,经过两轮各20天愈伤组织筛选(各20天),抗性愈伤转入分化筛选培养基,经过1个月左右陆续有再生苗长出,将再生苗转入生根培养基,长出壮根后移栽。经PCR和PCR-Southern杂交证明bar和P5CS两个基因均已整合于黑麦草基因组中。bar基因遗传转化率为0.72%,共转化频率为27.8%。(3) 以幼穗为外植体建立多年生黑麦草的遗传转化体系以50天左右的愈作组织为转化受体,经基因枪轰击后恢复培养7天,经愈伤组织筛选,愈伤转入分化筛选培养基,分化时间持续3个月,陆续有再生苗长出,经PCR检测,证明只有bar 基因整合于黑麦草基因组中,bar基因遗传转化率为2.7%。