研究背景尿液是一种容易获得、具有无创性取样的临床体液样本。基于质谱的蛋白质组学研究表明,尿液中含有数千种蛋白质,是各种疾病的生物标志物的潜在来源。但是,尿液中除蛋白外,还存在着大量的化合物干扰尿蛋白的质谱分析,故而,尿蛋白的提取是进行尿蛋白质组分析必不可少的一步。因此,探究丙酮沉淀后离心转速和温度对尿蛋白质组的影响显得尤为重要。此外,正常人尿液蛋白质组的个体差异与尿蛋白质组在人群中的稳定性有关,这关系到其是否能用于疾病标志物研究,对于尿蛋白质组学临床研究具有重要意义。研究方法本研究首先用不同离心转速(4 000×g和12 000×g)和离心温度(4℃和20℃)对丙酮沉淀后的人尿液样品进行离心,提取尿蛋白进行质谱分析,通过比较4种方法所鉴定的蛋白数目、多肽数目、谱图数目,以及等电点、分子量分布情况、误切率和翻译后修饰的情况,确定丙酮沉淀后尿蛋白离心的最佳条件。将上述优化的离心条件用于36例(男女比例为1:1)正常人尿液蛋白质组分析,并使用非标记定量方法,研究正常人尿液蛋白质组的个体差异、技术差异以及最小样本量。研究结果实验结果显示,在低温高转速条件下(4℃,12 000 ×g),蛋白数目、多肽数目、谱图数目最多,鉴定到的低分子量、偏酸性的蛋白较多,鉴定效果最好,正常人尿液蛋白质组学分析中,个体差异为0.635,能进行非标定量蛋白质组分析所需最小样本量为16。研究结论本项研究比较了不同的离心转速和离心温度下,尿蛋白提取效率和质谱分析结果,确定了最佳尿蛋白离心方法。并且在最优离心方法下,使用非标记定量方法评估了个体间差异以及尿液蛋白质组分析所需的最小样本量。本研究为今后的尿蛋白提取提供了最优离心方案,为尿蛋白质组基础研究和临床应用奠定了基础。