第一部分：髓源性抑制细胞在小鼠肝移植耐受中的作用研究[目的]髓源性抑制细胞(MDSC)是一群新近发现的,具有强大免疫调控功能的髓系细胞群。研究证实MDSC具有促进小鼠胰岛细胞移植耐受的功能,但MDSC在小鼠肝移植(mLT)后免疫耐受过程中发挥的作用还不甚清楚。本实验目的在于研究小鼠肝移植后移植肝内T细胞、B细胞以及调节性T细胞(Treg)和MDSC的改变对小鼠肝移植免疫耐受过程的影响。[方法]本实验利用小鼠肝移植模型,在体内水平研究了肝移植后移植肝内免疫微环境的改变和MDSC的数量变化趋势,以及MDSC在移植肝耐受过程中的作用。[结果]小鼠异基因肝移植后移植肝内T细胞、B细胞的数量明显增加以及调节性T细胞(Treg)和MDSC浸润增多；在肝移植后早期(4周以内),异基因移植肝内有大量淋巴细胞浸润,肝组织遭到不同程度的破坏；肝移植耐受期(8周后),移植肝内浸润的淋巴细胞减少,肝细胞再生,小叶结构恢复正常；流式细胞学结果证实：在小鼠异基因肝移植的耐受过程中,MDSC数量增加,Treg数量增加,两者具有线性相关关系。[结论]小鼠异基因肝移植后,移植肝内存在一个免疫耐受的形成过程；在此过程中,移植肝内浸润的MDSC和Treg的数量均大幅上升,提示MDSC可能通过加强Treg功能调节移植肝内的免疫耐受过程。第二部分：髓源性抑制细胞在小鼠肝移植耐受中的作用机制研究[目的]小鼠肝移植的自发性免疫耐受一直是移植免疫学研究的热点之一,尽管近年的研究指出调节性T细胞(Treg),肝星状细胞,Kupffer细胞等均在这个过程中发挥了一定的作用,但至今仍无法很好的解释自发性耐受的机制和原因。第一部分的实验结果说明小鼠肝移植耐受诱导过程中MDSC在移植肝内浸润增多,并与Treg增加具有一定的协同关系,这些结果提示我们：MDSC在小鼠肝移植耐受过程中扮演了重要的角色,MDSC的免疫负向调控功能可能与Tregs有关。本实验的目的在于研究MDSC对效应T细胞增殖和死亡的影响；Treg在MDSC免疫调控中的作用；参与MDSC免疫调控的因子和调控机制。[方法]分离纯化同基因和异基因移植肝内的MDSC细胞,与野生型效应T细胞(D25-Tcell混合培养,在培养体系中加入或不加入野生型Treg,共培养72小时后,观察MDSC对效应T细胞的抑制作用和MDSC与Treg协同调控的作用；收集同基因/异基因组小鼠血清样本,ELISA测定血清IL-10、IL-35和TGF-β的水平；利用miRNA芯片,找到同基因/异基因移植肝内不同的基因表达,通过Genbank和文献比对,找到与MDSC功能相关的基因改变。[结果]MDSC可以在不依赖Treg协助的情况下完成诱导效应T细胞死亡的功能；但是,MDSC执行抑制效应T细胞增殖的功能时,必须需要Treg的协助；ELISA结果显示异基因移植组小鼠血清IL-10水平明显高于同基因移植组；miRNA芯片检测和分析结果共发现差异基因188个,经软件预测分析和文献查询分析后我们共找出11个与免疫调控密切相关的差异基因；RT-PCR验证发现其中有3个差异基因在两组间具有显著性差异,且可能在移植免疫调控中发挥重要的作用。通过miRNA芯片检测和分析,我们首次发现mmu-miR-152-CaMKⅡ-IL6/IL10信号通路在MDSCs介导的移植免疫调控起到重要的作用。[结论]MDSC通过促进效应T细胞死亡,并与Tregs协同抑制其增殖,从而在小鼠肝移植耐受诱导过程中发挥了重要的作用；IL-10是MDSC发挥免疫负向调控以及调控Treg功能的重要细胞因子；miRNA芯片检测和分析结果共发现差异基因188个,其中有10个差异基因可能与移植免疫调控有关,并可能参与TGF-日信号通路,从而在MDSC的免疫负向调控中起到重要的作用。