啤酒中三种酮类老化味物质的富集及分析方法的研究

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啤酒因其口感醇香、营养丰富成为了人们日常生活中不可或缺的饮品之一,啤酒风味作为评价啤酒品质的重要指标倍受广大消费者的关注。啤酒在生产、贮存与运输过程中,风味不断发生变化,逐渐产生一些令人不愉快的劣味,俗称“老化味”。不同类型的啤酒,老化的途径和速率不同,产生的老化味物质也不尽相同。对老化味物质含量进行分析检测,可有效地评价啤酒的老化程度,监控啤酒品质。因此建立啤酒中老化味物质的分析检测方法十分必要。本研究旨在建立一种同时测定啤酒中双乙酰、2,3-戊二酮和β-大马酮的高效液相色谱方法(HPLC).为实现双乙酰和2,3-戊二酮在紫外检测器上的检测,本研究进行了柱前紫外衍生化反应,并优化了衍生化反应条件,确定紫外衍生试剂为邻苯二胺,其用量为目标组分浓度的20倍,水浴反应温度为40℃,反应时间为2.5h,衍生化反应体系的pH为5。确定了最佳的色谱条件为:Nova-Pak C18色谱柱;以甲醇(A)-乙酸铵水溶液(B,30mmol/L)体系为流动相进行梯度洗脱,洗脱程序为0min A:B=50:50,保持3min,3~6min线性变化至80:20,保持4min,10~13min线性变化至50:50,平衡2min;紫外检测波长采用波长随时间变化程序,波长变化程序为0~6min237nm,6~13min227nm,13~15min237nm;自动进样,进样量为10μL;流动相流速为0.9mL/min;柱温:30℃。在最佳色谱条件下,15min即可完成3种目标组分的同时检测。为了有效地提取和富集啤酒样品中的3种目标组分,降低各物质的检出限,在改进高效液相色谱进样装置的基础上,本研究建立了分散液相微萃取(DLLME)的样品前处理方法。通过优化实验参数,确定了最佳的提取富集条件:萃取剂为250μL的二氯甲烷,分散剂为1.2mL的异丙醇,NaCl的加入量为0.3g,萃取体系的pH为6,萃取时间为10min。在最佳的分散液相微萃取条件下,双乙酰、2,3-戊二酮和β-大马酮的富集倍数可分别达45、63和121倍。在最佳的实验条件下,分别绘制了3种目标组分的工作曲线,各组分的线性相关系数为0.9996~0.9999,线性范围均达到103,检出限为0.3~0.9ng/mL(S/N=3),样品加标回收率为86~97%,相对标准偏差为2.4~4.4%。研究结果表明,所建立的分散液相微萃取-高效液相色谱法具有灵敏度高、准确性好、操作简便、分析成本低、富集倍数高、对环境友好等特点,完全可以满足对啤酒中3种主要酮类老化物质的同时分析测定。
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