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背景:细胞凋亡和炎症反应是造成脑出血后继发性脑损伤的重要因素,酪氨酸激酶Fyn介导的细胞凋亡和炎症反应参与多种神经系统疾病的实验模型,如帕金森病、阿尔茨海默、抑郁症等,但其在脑出血中的作用仍未可知。目的:探讨酪氨酸激酶Fyn在大鼠脑出血后炎症反应和细胞凋亡的作用及其潜在机制。方法:(1)基底节注入50μl自体血构建大鼠脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)模型。Western blot检测酪氨酸激酶Fyn在大鼠脑出血后3h、6h、12h、24h、48h、72h的表达时间分布。(2)通过术前24h侧脑室注射小干扰片段的方法抑制Fyn的表达并观察小干扰片段抑制Fyn后对大鼠脑出血后神经功能(Modified Neurological Severity Score,mNss)、脑水肿(脑水含量法)、脑组织形态学染色(H&E染色)结果及血脑屏障通透性(Evans Blue法)的影响。(3)Western blot检测抑制Fyn后对大鼠ICH后脑组织中炎症相关蛋白TNF-α、NF-κB、Caspase1、IL-1β和IL-18的影响;免疫荧光显微镜检测髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)的表达情况。(4)Western blot检测抑制Fyn后对大鼠ICH后脑组织中Pro-caspase3、Caspase3、Cyt.c、AIF、Bax和Bcl-2水平;血肿周围脑组织细胞凋亡用TUNEL检测。(5)CO-IP(Co-immunoprecipitation)检测Fyn和Drp1的相互作用。术中腹腔注射Mdivi-1抑制的Drp1的表达;术前5周AAV转染过表达Fyn;Western blot检测抑制Fyn后对大鼠ICH后脑组织中P-Fyn、Fyn、P-Drp1、Drp1,凋亡相关蛋白Pro-caspase3、Caspase3、AIF、Cyt.c、Bax和抗凋亡相关蛋白Bcl-2的蛋白水平。结果:(1)与Sham组相比,Fyn在大鼠脑出血后3h即开始升高并在24h达到表达最高锋。(2)与ICH组相比,抑制Fyn可以减轻脑水肿,改善神经功能评分,降低血脑屏障通透性,改善脑组织H&E染色结果。(3)与NC组相比,抑制Fyn对炎症相关蛋白TNF-α、NF-κB、Caspase1、IL-1β和IL-18的影响无统计学意义;MPO染色结果示抑制Fyn对血肿周围浸润的中性粒细胞影响不大。(4)与NC组相比,抑制Fyn可降低凋亡相关蛋白Caspase3、Bax、AIF、Cyt.c和增高抗凋亡相关蛋白Bcl-2的水平;TUNEL示抑制Fyn可减少血肿周围脑组织细胞凋亡数。(5)与NC组相比,CO-IP示Fyn与Drp1的相互作用,并磷酸化激活Drp1丝氨酸616(Ser616)位点,抑制Fyn可以减弱这种相互作用并减少其Ser616位点的磷酸化。(6)与NC组相比,过表达Fyn可增加P-Fyn、Fyn、P-Drp1及凋亡相关蛋白Caspase3、AIF、Cyt.c、Bax和降低抗凋亡相关蛋白Bcl-2的蛋白水平,而Mdivi-1(Mitochondrial division inhibitor 1,线粒体分裂抑制剂1)的使用可以逆转由Fyn过表达引起的凋亡相关蛋白Caspase3、AIF、Cyt.c、Bax的增高和抗凋亡相关蛋白Bcl-2的减低而不影响P-Fyn和Fyn的表达。结论:Fyn在脑出后表达增高并通过与Drp1相互作用和磷酸化Drp1丝氨酸616位点激活Drp1信号通路,诱导大鼠脑出血后细胞凋亡,而Fyn对大鼠脑出后炎症反应的影响无统计学意义。