目的制备糖尿病皮肤溃疡大鼠模型,观察回阳生肌膏及其不同拆方在不同时间点对糖尿病皮肤溃疡大鼠创面愈合及血管生成相关因子VEGF、VEGFR-2的影响,探讨回阳生肌膏对糖尿病皮肤溃疡大鼠创面愈合的作用机制,并阐释“回阳生肌”理论。方法1.56只SD大鼠随机分为：正常对照组(对照组)、模型组、回阳生肌膏全方组(全方组)、温阳益气拆方组(温阳组)和活血生肌拆方组(活血组)。采用“腹腔注射链脲佐菌素(streptozocin, STZ)—激素干预—皮肤缺损—塑料环埋置”方法制备糖尿病皮肤溃疡动物模型。对照组和模型组给予凡士林纱条,全方组给予回阳生肌膏全方纱条,温阳组给予温阳益气拆方纱条,活血组给予活血生肌拆方纱条。检测各组大鼠注射STZ72h、lw、2w随机血糖,计算给药3d、7d、l0d、4d创面愈合率,观察创面形态变化,给药14d取各组大鼠创面肉芽组织进行HE染色、Masson染色及CD34免疫组织化学染色,观察创面肉芽组织结构改变、胶原分布并计算微血管含量。2.120只SD大鼠随机分为：正常对照组(对照组)、模型组、回阳生肌膏全方组(全方组)、温阳益气拆方组(温阳组)和活血生肌拆方组(活血组)。采用“腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin, STZ)—激素干预—皮肤缺损—塑料环埋置”方法制备糖尿病皮肤溃疡动物模型。各组给予相应的药膏纱条。分别于给药3d、7d、14d每组以腹主动脉取血法处死6只大鼠,并取创面肉芽组织于液氮中保存。运用酶联免疫吸附法(Elisa法)检测大鼠血清中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor2, VEGFR-2)的含量,并用蛋白质印迹法(Western Blot法)检测各组创面肉芽组织中VEGF、VEGFR-2的蛋白表达情况。结果1.糖尿病组大鼠随机血糖值>16.7mmo1/1,明显高于对照组(P<0.01),各糖尿病组间血糖水平无差别(P>0.05),说明各组具有可比性。2.给药3d、7d、l0d、14d,模型组创面愈合率均明显低于对照组(P<0.01)；给药3d,温阳组创面愈合率高于模型组、全方组和活血组(P<0.05,P<0.05,P<0.05)；给药7d、14d,全方组创面愈合率高于模型组、温阳组和活血组(P<0.05,P<0.05,P<0.05)；给药10d,各给药组创面愈合率均高于模型组(P<0.05)。3.创面形态变化情况示：对照组：肉芽呈鲜红色,有稠黄脓液生成,创面较湿润,呈向心性生长,缩小速度快,有血痂覆盖,接近闭合,完全上皮化；模型组：创面发白,分泌物清稀量少,肉芽组织生成少,色白或淡红而无光泽,创面缩小缓慢；全方组：肉芽呈红色,生长良好,分泌物少,创面缩小速度较快,趋向闭合,大部分上皮化；温阳组：肉芽呈淡红色,有黄色脓痂或血痂覆盖,创面逐渐缩小；活血组：肉芽呈鲜红色,渗出少,有暗红色血痂覆盖,创面缓慢缩小。4.HE染色示：对照组：皮肤结构较完整,胶原纤维较粗,真皮中可见较多炎性细胞,未见毛囊及腺体；模型组：新生表皮菲薄,真皮中大量炎性细胞浸润,成纤维细胞散见,胶原纤维、毛细血管较少；全方组：有较厚新生表皮,真皮中成纤维细胞和炎性细胞散见,毛细血管含量丰富,胶原纤维较多较粗,交织成网；温阳组：有新生表皮,真皮中成纤维细胞和炎性细胞聚集分布,胶原纤维较多,形状较细；活血组：创面覆盖血浆和组织液形成的较厚痂皮,真皮中炎性细胞聚集,成纤维细胞较多,毛细血管含量较丰富,胶原纤维较细少。5.Masson染色示：对照组：胶原纤维较粗,交织成网；模型组：胶原纤维束稀疏,排列紊乱；全方组：胶原纤维密度均匀,较粗大,排列有序；温阳组：胶原纤维较粗,排列较规则；活血组：胶原纤维较细少,排列杂乱。6.CD34标记的微血管含量(IOD值)比较：模型组明显低于对照组(P<0.01),全方组、温阳组和活血组均显著高于模型组(P<0.01,P<0.01,P<0.01),温阳组与活血组均低于全方组(P<0.05,P<0.05),活血组低于温阳组(P<0.05)。7.VEGF含量比较：给药3d、7d、14d大鼠血清中VEGF含量,模型组明显低于对照组(P<0.01)；各给药组显著高于模型组(P<0.01)；温阳组和活血组均低于全方组(P<0.01)。给药3d、7d大鼠血清中VEGF含量,活血组低于温阳组(P<0.01)。给药14d大鼠血清中VEGF含量,活血组高于温阳组(P<0.01)。给药3d、7d、14d创面肉芽组织中VEGF蛋白相对量,模型组明显低于对照组(P<0.01)；各给药组显著高于模型组(P<0.01)。给药3d创面肉芽组织中VEGF蛋白相对量,活血组低于全方组和温阳组(P<0.01,P<0.01)。给药7d创面肉芽组织中VEGF蛋白相对量,温阳组和活血组均低于全方组(P<0.01,P<0.05)；活血组低于温阳组(P<0.01)。给药14d创面肉芽组织中VEGF蛋白相对量,温阳组低于全方组和活血组(P<0.01,P<0.01)。8.VEGFR-2含量比较：给药3d、7d、14d大鼠血清中VEGFR-2含量,模型组明显低于对照组(P<0.01)；各给药组显著高于模型组(P<0.01)。给药3d大鼠血清中VEGFR-2含量,活血组低于全方组和温阳组(P<0.01,P<0.01)。给药7d大鼠血清中VEGFR-2含量,温阳组和活血组与全方组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。给药14d大鼠血清中VEGFR-2含量,温阳组低于全方组和活血组(P<0.05,P<0.05)。给药3d、7d、14d创面肉芽组织中VEGFR-2蛋白相对量,模型组明显低于对照组(P<0.01)；各给药组显著高于模型组(P<0.01)。给药3d创面肉芽组织中VEGFR-2蛋白相对量,活血组低于全方组和温阳组(P<0.01,P<0.01)。给药7d创面肉芽组织中VEGFR-2蛋白相对量,温阳组和活血组与全方组比较无统计学差异(P>0.05)。给药14d创面肉芽组织中VEGFR-2蛋白相对量,温阳组低于全方组和活血组(P<0.01,P<0.01)。结论1.回阳生肌膏可以有效促进糖尿病皮肤溃疡大鼠创面的愈合,温阳益气拆方在愈合早期作用较明显,活血生肌拆方在愈合中后期效果较显著,且单独应用拆方不如全方效果好。2.回阳生肌膏可以促使新生肉芽组织生长良好,丰富毛细血管和胶原纤维含量,增加微血管含量,通过促进创面肉芽组织中血管生成而促进创面愈合。3.血管生成相关因子VEGF、VEGFR-2表达水平下降可能是糖尿病皮肤溃疡难以愈合的机制之一,回阳生肌膏可以通过提高大鼠血清及创面肉芽组织中VEGF、VEGFR-2蛋白的表达水平,促进创面愈合,且可使其表达该蛋白的峰值提前。