目的：结直肠癌是一种“现代病”-与现代生活方式和饮食类型有关。大量流行病学，特别是移民流行病学研究显示，结直肠癌的发病与能量摄入过多、肥胖、体力活动减少有关。就病因学而言，起决定作用的因素是环境因素而非遗传因素，结直肠癌是一个生活方式相关癌。在发展中国家，人们越来越多的采用与癌相关的生活方式包括体力活动减少，饮食“西方化”导致的肥胖是结直肠癌发病率快速上升的重要原因。据预测，我国的结直肠癌发病率和死亡率在今后很长一段时期内将稳步上升，成为最常见、发病率上升最快的恶性肿瘤之一。脂肪组织分泌雌激素、胰岛素和胰岛素样生长因子，还分泌不同的生物活性物质，称作脂肪因子，其中最引人注目的是瘦素(Leptin)和脂联素(Adiponectin)。下丘脑分泌的脑源性神经营养因子( Brain-derived neurotrophic factors，BDNF)作用于白色脂肪组织调节瘦素的合成和分泌，称为BDNF/Leptin轴，酪氨酸激酶受体B(Tyrosine kinase receptor B，Trk B)是BDNF的特异性受体。瘦素的血清浓度与身体脂肪总量和总体重直接相关。我们的前期实验针对瘦素、瘦素受体在结直肠癌组织和正常肠管组织中的表达情况进行了研究，发现瘦素和瘦素受体与结直肠癌密切相关。本研究采用Western blot的方法检测结肠癌细胞株DLD-1中瘦素和BDNF的表达，进一步分析瘦素和BDNF与结直肠癌的关系，同时用酶标仪MTT法观测瘦素和BDNF与结直肠癌细胞增殖生长的关系，探讨可能影响结直肠癌发生、发展的因素，试图为结直肠癌的诊断和治疗提供新的方法和理论依据。　　 方法：　　 1.人结肠癌细胞株DLD-1和正常人肠上皮细胞株HIEC均由中山大学肿瘤防治中心（华南肿瘤学国家重点实验室）赠送。将其置于含10％胎牛血清的DMEM培养液，37℃，5％的CO2培养箱中培养。定期更换培养液，显微镜动态观察细胞生长情况，及时传代培养。　　 2.蛋白免疫印迹Western blot的方法检测结肠癌细胞株DLD-1和正常肠上皮细胞株HIEC中瘦素、BDNF和Trk B蛋白的表达情况。首先用细胞裂解液裂解细胞，获取蛋白提取液，并用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定总蛋白浓度。其次将蛋白提取液SDS-PAGE电泳，目的是根据分子量大小不同从蛋白提取液中分离出目的蛋白。再次，电转仪中将凝胶上目的蛋白转移到PVDF膜上，PVDF膜封闭后与相应一抗抗体充分孵育，抗原和抗体特异性结合反应。二抗经过辣根过氧化物酶偶联标记，识别结合一抗后与发光液接触可发出荧光。最后X光片压片、曝光、洗片和显影。　　 3.酶标仪MTT法检测瘦素和BDNF对结直肠癌细胞增殖生长的影响。体外培养结肠癌细胞株DLD-1，取处于生长对数期活性好的肿瘤细胞，形成细胞悬液后细胞计数并均匀接种于96孔板中，细胞浓度为103个/孔。分别用不同浓度的瘦素、BDNF和（或）氟尿嘧啶（fluorouracil.5-FU）进行干预处理，培养箱中继续培养，一定时间(24h、48h、72h)后，加入相应MTT和DMSO液，酶标仪570nm波长处测定其OD值。按照下列公式计算肿瘤增殖率和抑制率。肿瘤增殖率=（实验组一对照组）/对照组×100％。肿瘤抑制率=（对照组一实验组）/对照组×100％。　　 4.统计学分析　　 采用SPSS13.0统计软件处理所得数据，各组数据以均数±标准差(ヌ±s)表示，定量资料的比较采用单因素多水平方差分析(one-way ANOVA)，以P＜0.05为差异有统计学意义。　　 结果：　　 1.结肠癌细胞株DLD-1高表达瘦素和Trk B，不表达BDNF。正常肠上皮细胞株HIEC不表达瘦素和BDNF，低表达Trk B。　　 2.瘦素的肿瘤增殖率随浓度升高而逐渐增高，浓度小于10-9mol/L时与空白组比较增高不明显(p＞0.05)，等于或大于10-9mol/L时与空白组比较显著增高(p＜0.05)。同一浓度随时间增加，肿瘤增殖率也逐渐上升。等于或大于10-9mol/L的各浓度，其24h与48h的增殖率相比较差异明显(p＜0.05)，但48h与72h无显著差异(p＞0.05)。瘦素减少5-Fu的肿瘤抑制作用，24h、48h和72h均降低5-Fu的肿瘤抑制率，有统计学意义(p＜0.05)。　　 3.BDNF的肿瘤增殖率随浓度升高而逐渐增高。浓度等于或小于0.05μ g/mL时与空白组比较增高不明显(p＞0.05)，大于0.05 u g/mL时与空白组比较显著增高(p＜0.05)。同一浓度随时间增加，肿瘤增殖率也逐渐上升。24h与48h差异不明显(p＞0.05)，72h肿瘤增殖率显著高于24h(p＜0.05)。BDNF也能减少5-Fu的肿瘤抑制作用，24h、48h和72h均明显降低5-Fu的肿瘤抑制率(p＜0.05)。　　 结论：　　 1.瘦素能够促进人结肠癌细胞株DLD-1增殖，浓度越高，时间越长，增殖作用越强。　　 2.人结肠癌细胞株DLD-1高表达瘦素，说明在结直肠癌中，肿瘤细胞可以自己合成和分泌瘦素，促进自身增殖。　　 3.BDNF能够促进人结肠癌细胞株DLD-1增殖，浓度越高，时间越长，增殖作用越强。　　 4.人结肠癌细胞株DLD-1不表达BDNF，但高表达BDNF的特异性受体Trk B。说明在结直肠癌中，肿瘤细胞不能自身合成BDNF，但能接受外源性BDNF信号，导致细胞增殖。