基于二氧化钛新材料的唾液酸糖蛋白富集与鉴定方法的建立与应用

来源 :北京工业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:zhuyx82
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糖基化是一类重要的蛋白质翻译后修饰,其在细胞功能及分泌途径中发挥着重要作用。唾液酸是一类九碳糖结构单元,广泛存在于糖蛋白的糖链修饰末端,这些糖蛋白参与调节大量生理及病理过程。因此,针对唾液酸化糖蛋白质组学的研究将有助于更好的了解这一修饰以及其对蛋白质功能的影响。血浆是已知生物标志物的重要来源,众多已知的血浆生物标志物是糖蛋白,规模化血浆糖蛋白的发掘,将有助于发现更多的候选标志蛋白质。  二氧化钛是一种近年来富集磷酸化修饰肽段的重要方法,由于唾液酸与磷酸基团相似的结构特征,有研究表明,其同样可以特异性结合二氧化钛颗粒。本研究的第一部分,对二氧化钛材料用于富集唾液酸化糖肽的方法进行了优化,建立了特异性的富集策略。该策略进一步用于提高对血浆中蛋白质唾液酸糖基化修饰的发现研究。采用二氧化钛亲和富集与多种分离方式联用的手段,对血浆中N-唾液酸糖基化位点进行了大规模鉴定与分析。分析结果显示,利用基于超滤管辅助酶切方法、二氧化钛亲和富集、多酶联合酶切策略及二维反相色谱分离技术,可以实现对血浆N-唾液酸化糖蛋白质组的全面解析。利用这一策略,在健康人血浆中共鉴定得到982个N-唾液酸糖基化位点,对应413个糖蛋白,其中有37.8%的位点在国际上首次被鉴定到,该数据集是目前血浆中唾液酸糖基化位点鉴定工作中规模最大的。进一步应用iTRAQ标记方法结合二氧化钛亲和技术,建立了唾液酸化糖蛋白质组定量分析体系,并将之应用于肝癌病人与正常人血清中差异蛋白的研究。
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