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背景和目的:胎盘血管形成障碍被认为是导致子痫前期(preeclampsia,PE)发病的主要原因之一,但其具体的机制尚不完全清晰。近年来,研究显示神经病靶酯酶(neuropathy target esterase,NTE)在胎盘发育中起至关重要的作用,其生理底物磷脂酰胆碱注射于妊娠小鼠体内,可诱发高血压、蛋白尿等子痫前期的症状,且与胎盘血管形成密切相关,故推测NTE可能参与了子痫前期胎盘血管形成障碍。本研究拟探讨NTE在子痫前期中的表达变化及其对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖、迁移和血管管形形成的影响及其作用机制。方法:1、通过免疫组织化学技术和Western blot方法,检测NTE蛋白在正常妊娠和子痫前期胎盘组织中的表达变化。2、通过转染pEGFP-N3-NTE和pGenesil-1-shNTE质粒,在HUVECs中产生NTE过表达或抑制。3、通过MTS实验,观察过表达或抑制NTE对HUVECs增殖的影响。4、通过划痕实验和Transwell小室法,观察NTE过表达或抑制后对HUVECs迁移的影响。5、通过体外管形形成实验,观察NTE过表达或抑制后对HUVECs血管管形形成的影响。6、通过ELISA方法检测NTE过表达或抑制后细胞上清液sFlt-1的水平变化。7、通过薄层色谱法和PC检测试剂盒,观察NTE过表达或抑制后HUVECs中的磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC)和甘油磷酸胆碱(glycerophosphocholine,GPC)的表达水平。8、通过在培养液中加入不同剂量磷脂酰胆碱(PC),观察PC对HUVECs血管管形形成的影响。9、通过在培养液中加入不同剂量溶血卵磷脂(lysophosphatidylcholine,LPC),观察LPC对HUVECs血管管形形成的影响。结果:1、通过免疫组织化学方法检测显示,在正常妊娠胎盘与子痫前期胎盘组织中,NTE蛋白在胎盘组织的血管位置(CD31分子显示)均有表达。与正常妊娠的胎盘组织相比,子痫前期胎盘组织中NTE蛋白的表达水平明显下降。2、通过Western blot检测显示,相对于正常妊娠的胎盘组织,在子痫前期胎盘组织中,NTE蛋白表达水平明显下降(P<0.01)。3、通过实时荧光定量PCR和Western blot检测显示,相对于Control组,NTE-EGFP组中NTE mRNA(P<0.001)和NTE蛋白(P<0.01)显著升高。NTE shRNA组中NTE mRNA(P<0.001)和NTE蛋白(P<0.05)显著降低。4、通过MTS实验观察显示,转染后24 h,48 h和72 h,与Control组相比较,20%FBS组和NTE-EGFP组,均明显促进HUVECs的增殖(P<0.05);NTE shRNA组,均明显抑制HUVECs的增殖(P<0.05)。5、通过划痕实验和Transwell小室法观察显示,各组间相比较,NTE-EGFP组HUVECs迁移能力均显著增强(P<0.01)。NTE shRNA组HUVECs迁移能力均明显减弱(P<0.01)。6、通过体外管形形成实验分析显示,转染24 h各组间比较,NTE-EGFP组HUVECs管形形成数量明显增加(P<0.001),管形形成面积明显更大(P<0.01)。NTE shRNA组HUVECs管形形成数量(P<0.001)和面积均明显减少(P<0.05)。7、通过ELISA分析显示,转染24 h和48 h后,NTE-EGFP组HUVECs分泌sFlt-1量均显著减少(P<0.05)。NTE shRNA组HUVECs分泌sFlt-1量均显著增加(P<0.05)。8、通过薄层色谱法检测显示,转染24 h后,各组间相比较,NTE-EGFP组PC水平显著降低(P<0.01),GPC水平显著升高(P<0.01)。NTE shRNA组PC水平显著升高(P<0.001),GPC水平显著降低(P<0.01)。PC检测试剂盒检测显示,转染24 h,各组间比较,NTE-EGFP组PC水平显著降低(P<0.001)。NTE shRNA组PC水平显著升高(P<0.001),与薄层色谱法的检测结果一致。9、通过体外管形形成实验分析显示,用0、0.2、0.5、1.0μM的PC处理HUVECs 24h后,相对于0μM组,0.2、0.5、1.0μM组随剂量增加,管形形成数量和面积均明显减少(P<0.001)。10、通过体外管形形成实验分析显示,用0、0.2、0.5、1.0μM的LPC处理HUVECs 24h后,相对于0μM组,0.2、0.5、1.0μM组随剂量增加,管形形成数量和面积均明显减少(P<0.001)。结论:1、与正常妊娠的胎盘组织相比,在子痫前期胎盘组织及胎盘血管部位NTE蛋白的表达水平均明显下降。2、NTE抑制后,HUVECs的增殖、迁移和血管管形形成能力均明显减弱。3、NTE通过调节HUVECs的sFlt-1分泌影响子痫前期胎盘的血管形成。4、NTE通过调节PC、GPC、LPC代谢,影响子痫前期胎盘血管形成。