背景：肿瘤是严重危害人类健康的一类恶性疾病，化学治疗是其主要治疗方法之一，而化疗中肿瘤细胞多药耐药是肿瘤患者死亡的主要原因，目前，对肿瘤耐药的分子机制和治疗已取得了相当的成就，但这些还远不能圆满解释肿瘤多药耐药的发生机理。临床上治疗多药耐药肿瘤的药物寥寥无几。因此，寻找新的耐药相关分子和治疗新途径和新药物，已成为肿瘤研究的热点。 目的：本课题通过由蛇毒粗毒中寻找抗肿瘤组分(CⅡ-3-1)，为中华眼镜蛇毒组分(CⅡ-3-1)的抗肿瘤作用机理奠定基础，然后研究中华眼镜蛇毒组分CⅡ-3-1抗肿瘤多药耐药作用及机制。 方法：一、中华眼镜蛇毒组分的分离纯化、鉴定、毒性及其抗肿瘤筛选研究 1.分离、纯化、鉴定及毒性研究应用凝胶层析法对眼镜蛇毒组分CⅡ进行分离纯化，采用SephadexG-75，SephadexG-25通过AKTAexplorer100蛋白快速纯化仪分别进行分离和脱盐，然后冻干保存HPLC分析鉴定层析组分以及蛇毒CⅡ和CⅡ-3-1的LD50测定。 2.抗肿瘤活性筛选应用MTT法进行蝎毒各分离组分的抗肿瘤筛选工作，主要观察对人肺癌A549细胞、人早幼粒细胞白血病细胞HL-60、人红白血病细胞敏感株K562和人红白血病细胞耐药株K562/A02的杀伤作用。 二、中华眼镜蛇毒组分CⅡ-3-1抗肿瘤多药耐药作用及机制。 1.应用MTT法对比研究CⅡ-3-1对K562和K562/A02单用及联合阿霉素体外的抑制增殖作用。 2.应用流式细胞仪染色法检测中华眼镜蛇毒组分CⅡ-3-1诱导K562/A02细胞的凋亡作用。 3.采用流式细胞仪法分析中华眼镜蛇毒组分CⅡ-3-1对K562/A02细胞的P-gp蛋白功能的影响。 结果：1.中华眼镜蛇毒经过SephadexG-75分离、SephadexG-25脱盐后得10个组分。HPLC结果显示出显示出CⅡ-3-1主要由1个峰构成，相对纯度为52.35％。蛇毒粗毒及组分CⅡ-3-1的LD50分别为0.602mg/kg、0.622mg/kg。蛇毒组分CⅡ-3-1的毒性与蝎毒粗毒强差别不大，该结果表明，蝎毒粗毒经过纯化后，其有效成分CⅡ-3-1毒性可以完全保存。 2.中华眼镜蛇毒组分CⅡ-3-1单用对多药耐药细胞K562/A02及敏感细胞K562都有很强的杀伤作用。 3.流式细胞仪检测发现1.25、2.5、5ug/ml浓度中华眼镜蛇毒组分CⅡ-3-1作用K562/A02细胞3小时后，细胞调亡率分别为10.6±2.17、18.8±2.99、48.5±4.05，随着作用时间增加，调亡率也增加。 4.中华眼镜蛇毒组分CⅡ-3-1可以抑制多药耐药细胞K562/A02内Rh-123的外排。 结论：蛇毒粗毒经过SephadexG-75、SephadexG-25柱可分离到10个组分，组分Ⅲ经SephadexG-25柱脱盐又可分离为峰1～3，其中峰1为CⅡ-3-1，并发现在所有组分中，中华眼镜蛇毒组分CⅡ-3-1的抗肿瘤作用最强。中华眼镜蛇毒组分CⅡ-3-1对多药耐药白血病细胞K562/A02及敏感细胞K562均有较强的抑制作用，且抑制作用与剂量呈正相关。中华眼镜蛇毒组分CⅡ-3-1能明显诱导K562/A02细胞凋亡，蛇毒组分对K562/A02的诱导凋亡作用可能是与抑制耐药细胞P-gp蛋白功能相关。本课题的研究将对今后进一步分离提纯及揭示蛇毒抗肿瘤组分的抗肿瘤作用机理提供理论基础。