【摘 要】
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目的 构建EBV即刻早期基因BZLF1的非复制型重组腺病毒载体,293细胞包装腺病毒,并检测BZLF1在293细胞中的表达,为进一步研究腺病毒介导BZLF1进行EBV相关肿瘤的基因治疗奠定基
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目的 构建EBV即刻早期基因BZLF1的非复制型重组腺病毒载体,293细胞包装腺病毒,并检测BZLF1在293细胞中的表达,为进一步研究腺病毒介导BZLF1进行EBV相关肿瘤的基因治疗奠定基础。 方法 RT-PCR扩增EBV BZLF1基因片段,经双酶切后亚克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV上,用TSS两步法与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转染大肠杆菌BJ5183,经细菌内同源重组产生携带BZLF1基因的重组腺病毒载体pAd-BZ,脂质体法转染人胚肾293细胞,包装产生重组腺病毒vAd-BZ。采用RT-PCR和Western blotting检测BZLF1基因在293细胞中的表达。 结果 通过PCR、序列测定、双酶切等技术鉴定BZLF1基因已正确插入穿梭质粒中,并与病毒骨架质粒pAdEasy-1重组,成功构建了表达BZLF1基因的重组腺病毒。荧光显微镜观察到绿色荧光,证实在293细胞中包装出vAd-BZ,PCR和Western结果表明转染pAd-BZ的293细胞中有BZLF1基因的表达。 结论 成功构建了表达EBV BZLF1重组腺病毒vAd-BZ,为进一步探讨BZLF1基因表达诱导EBV阳性肿瘤细胞中潜伏感染状态病毒进入裂解期,进而杀伤EBV阳性肿瘤细胞奠定了实验基础。
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