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目的:探讨鞘内给予细胞周期依赖性激酶5(Cdk5)特异性拮抗剂Roscovitine对骨癌痛小鼠的行为学及脊髓水平NR2B mRNA表达的影响。
方法:雄性C3H/HeJ小鼠102只,随机分为假手术组(n=30)和肿瘤组(n=72)。肿瘤组于小鼠右侧股骨远端骨髓腔接种NCTC2472溶骨性纤维肉瘤细胞,建立骨癌痛模型;假手术组注入不含肿瘤细胞的α-MEM。各组于术前1 d,术后3 d、5 d、7 d、10 d、14 d随机取6只小鼠检测痛行为学指标:机械痛缩足阈值(paw withdrawalmechanical threshold,PWMT)和热痛缩足潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL)。术后14 d,肿瘤组再随机分为4组,即:Roscovitine5μg组(n=6)(R1组)、Roscovitine10μg组(n=6)(R2组)、Roscovitine20μg组(n=30)(R3组)和溶媒组(n=30)(10％dimethyl sulphoxide,DMSO)(T组);假手术组(n=30)即为S组。R3组和T、S组给药后根据观察时间点(注射前1 h、注射后6、24、48和72 h)又进一步分为5小组,每组6只;R1、R2、R3组鞘内注射相应剂量的Roscovitine,T、S组给予10％DMSO,注药体积均为5μl,鞘内注射前1 h及注射后6 h、24 h、48h、72 h再测定痛行为学;S组、T组和R3组的小鼠在注射前1 h、注射后6 h、24 h和48 h痛行为学测定后,断头处死,取L3～5脊髓,采用RT-PCR(Reverse transcriptivepolymerase chain reaction,RT-PCR)法测定脊髓组织NR2B mRNA的表达水平。
结果:(1)各组术前基础机械缩足阈值及热缩足潜伏期比较差异无统计学意义(P＞0.05);所有小鼠在接种后3 d都出现痛行为学改变,但肿瘤组和假手术组小鼠之间的差别无统计学意义(P＞0.05);接种后5 d,所有小鼠的痛行为学指标都恢复到接种前水平;接种后7 d,肿瘤组小鼠的PWMT(1.05±0.26)g,与假手术组鼠(1.85±0.28)g相比明显降低(P＜0.05);接种后10 d,肿瘤组小鼠的PWTL(12.6±1.2)s较假手术组小鼠(18.6±2.0)s明显缩短(P＜0.05),肿瘤组小鼠的痛行为学随时间逐渐加重,与假手术组小鼠比较有显著统计学意义(P＜0.05);(2)制模术后14 d鞘内给药前,T组小鼠的PWMT及PWTL与R1、R2、R3组之间的差别无统计学意义(P＞0.05);R1组小鼠鞘内注射Roscovitine5μg后,各时间点的PWMT及PWTL与T组及给药前相比无统计学差异(P＞0.05);R2组小鼠鞘内注射Roscovitine10μg24 h后,PWMT从(0.50±0.11)g增加到(0.73±0.24)g,PWTL从(10.5±0.7)s增加到(13.4±0.5)s,48 h后药物改善骨癌痛行为学的作用消失;R3组小鼠鞘内注射Roscovitine20μg24 h后,PWMT从(0.50±0.11)g增加到(0.90±0.19)g,PWTL从(10.7±1.5)s增加到(15.0±1.1)s,48 h后改善的PWMT和PWTL有所下降,72h后药物改善骨癌痛行为学的作用消失;(3)鞘内注射24 h后,R3组小鼠脊髓水平NR2B mRNA的表达(0.55±0.03)较T组(0.63±0.01)降低(P＜0.05);48 h后,R3组小鼠脊髓水平NR2B mRNA的表达与T组比较,无统计学差异(P＞0.05)。
结论:鞘内注射Cdk5抑制剂Roscovitine能有效改善骨癌痛小鼠的痛行为学,并能下调脊髓水平NR2B mRNA表达。