论文部分内容阅读
目的研究2006年秋冬季腹泻患儿轮状病毒基因型。方法收集昆明医学院第一附属医院2006年10月~2006年12月住院的腹泻患儿的粪便标本60份,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测RV抗原,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法以及巢式聚合酶链反应(net-PCR)进行VP7和VP4基因分型,从VP7阳性标本中随机挑选出4株重型腹泻和4株轻型腹泻患儿以及4株合并呼吸道感染的患儿的标本通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增NSP4基因并进行测序,测序结果应用DNAassist和Clustal-mp以及MEG3.0软件进行序列分析。结果(1)60份粪便标本中,40份检测到A组轮状病毒RNA基因,阳性率为66.7%;(2)40份阳性标本进行VP7基因分型研究,其中33份扩增出VP7基因全长片断,对阳性标本进行VP7基因分型研究,G3型为18(54.5%),其中G1型3例(9%),G1和G3混合感染型6例(18.1%),G2和G3混合感染5例(15.1%),G1与G9混合感染1例(3.3%),未发现其他型;(3)43份阳性标本40份扩增出VP4基因全长片段,对阳性标本进行VP4基因研究,P8型为31例(77.5%),P6型4例(10%),P8和P6混合感染型1例(2.5%),未分型4例。(4)轮状病毒G型和P型的组合G3P8型为主,占42.4%。(5)33份VP7阳性标本均可以扩增出NSP4的全长片段,在这12株昆明株中有9株与来自GenBank Database的人RV(Wa、KUN、AU-1、Ho-chi)和动物RV(EW、OSU、SA11)同源性分别为90%~94%、80~81%、77%~79%、60%~62%、60.5%~62%、86%~88%、79%~80%,与韩国、斯洛文尼亚以及中国各地区流行株同源性均在90%以上.3株昆明株与以上来GenBankDatabase的标准株和其他地区流行株核苷酸和氨基酸的同源性均低于80%.结论昆明地区A组Rv以G3P8型为主要流行基因型,混合感染比例较往年有所增加,并出现新的基因型G9型,合并有呼吸道感染的多为G3P8型;12株昆明地区轮状病毒株的NSP4基因9株为Wa型,3株出现变异.