固定化脂肪酶PCL的制备及其催化合成α-亚麻酸甘油二酯的应用研究

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研究表明,富含α-亚麻酸的甘油二酯在降低超重个体的内脏脂肪面积、体重指数和血清甘油三酯浓度等方面具有很好的治疗作用。目前,关于α-亚麻酸甘油二酯的研究主要集中在其生理活性方面,而关于其生物合成的报道则较少。来自卡门柏青霉菌的脂肪酶PCL是一种偏甘油酯脂肪酶,其仅能分解或合成甘油单酯和甘油二酯,而对甘油三酯无活性,该独特的底物特异性使其具有应用于合成高纯度甘油二酯的巨大潜力。本研究将发酵制备得到的PCL固定化后,将其应用于酯化制备富含α-亚麻酸的甘油二酯,产物通过分子蒸馏进行分离纯化,并对得到的高纯度富含α-亚油酸的甘油二酯的基本理化性质进行了研究。得到的主要研究结果如下:1.脂肪酶PCL的发酵制备及固定化:考察了6种不同树脂对发酵制得的脂肪酶PCL粗酶液的固定化效果,发现树脂ECR8806为其最佳载体;在优化条件下,最终得到的固定化PCL的酯化活力为598.15 U/g;通过傅里叶红外光谱(FT-IR)和激光共聚焦显微镜(CLSM)对固定化PCL进行了表征,结果表明脂肪酶PCL被成功地固定到树脂ECR8806表面及内部;对固定化PCL的酶学性质进行了研究,发现和游离PCL相比,固定化PCL的最适反应温度保持不变,但其温度耐受性显著提高。2.固定化PCL催化酯化合成富含α-亚麻酸的甘油二酯:比较了固定化PCL分别催化α-亚麻酸和α-亚麻酸乙酯与甘油反应时的酯化率,发现α-亚麻酸具有更高的酯化率;进一步考察了各反应因素对固定化PCL催化α-亚麻酸与甘油酯化的影响,在优化的反应条件下:α-亚麻酸与甘油的摩尔比为1:4,加酶量为底物总质量的5%,反应温度为40°C,α-亚麻酸的酯化率达到89.24%,此时产物中甘油二酯的含量为54.49%;固定化PCL重复使用10个批次后,仍能保持其最初活力的91.60%。3.富含α-亚麻酸的甘油二酯的分离纯化及基本理化性质研究:在上述优化的反应条件下,通过放大反应制备富含α-亚麻酸的甘油二酯,反应9 h后,产物中含52.98%甘油二酯;分子蒸馏纯化后,产物中甘油二酯的含量达到99.28%(1,3-甘油二酯,67.76%;1,2-甘油二酯,31.52%),且甘油二酯中含78%的α-亚麻酸;制备得到的高纯度富含α-亚麻酸的甘油二酯的酸价、过氧化值、碘价和皂化值分别为0.21 mg KOH/g、2.83mmol/kg、201.13 g/100 g(以I2计)和193.34 mg KOH/g;研究发现,当添加抗氧化剂TBHQ到高纯度富含α-亚麻酸的甘油二酯中时,可有效抑制富含α-亚麻酸的甘油二酯的氧化。
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