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目的研究野艾蒿中4种黄酮类单体化合物:木犀草素、柚皮素、槲皮素、芹菜素和萜类化合物熊果酸对HepG2细胞的AMPK和LPIN1表达的影响,从分子水平探明其降血脂的有效成分。方法以HepG2细胞为研究对象,用细胞毒性实验(MTT法)观察野艾蒿中4种单体黄酮类化合物与萜类化合物熊果酸在不同用药时间和浓度时对HepG2细胞增殖的影响,并从中筛选出合适的用药浓度和作用时间。实验以5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)做阳性对照,应用流式细胞技术检测槲皮素和芹菜素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的情况。将实验分为对照组和药物组,根据筛选出的用药时间和浓度对培养细胞进行药物干预,分别抽提对照组和实验组细胞总RNA与总蛋白,RT-PCR检测LPIN1、AMPKα1和AMPKα2 mRNA表达情况,Western blot方法检测LPIN1、AMPKα1、AMPKα2和p-AMPK蛋白表达情况。结果(1)4种黄酮类单体化合物和萜类化合物熊果酸均可不同程度抑制HepG2细胞的增殖,并在用药浓度为0.01 mg/ml、作用时间24h(药物对细胞的抑制率在15%-25%)为最适合作用条件。(2)槲皮素与芹菜素可诱导HepG2细胞发生凋亡。两组药物早期凋亡率分别为(9.10±0.61)%,(7.47±1.51)%;晚期凋亡为(40.03±3.19)%,(38.07±1.75)%,与对照组细胞早期凋亡(4.80±1.1)%和晚期凋亡(13.7±2.87)%比较均有所升高,有统计学意义(P<0.05)。(3)RT-PCR结果显示,药物组AMPKα1mRNA表达与对照组比较无显著差异(P>0.05);药物组AMPKα2 mRNA表达与对照组比较,柚皮素、槲皮素和熊果酸有统计学意义(P<0.05),且表达水平升高;LPIN1 mRNA表达中,药物组与对照组比较均有显著性差异(P<0.01),且表达量均显著降低;(4)Western blot结果显示,药物组AMPKα1蛋白表达与对照组比较,均无显著性差异(P>0.05);AMPKα2蛋白表达中,5种药均有显著性差异(P<0.05),且表达量升高;LPIN1蛋白表达中,药物组与对照组比较均有显著性差异(P<0.01),且表达量均降低;p-AMPK蛋白表达均有显著性差异(P<0.01),且表达水平升高,提示野艾蒿乙酸乙酯提取的黄酮和萜类化合物可通过磷酸化使AMPK活化。结论(1)野艾蒿乙酸乙酯提取的5种单体化合物可不同程度抑制HepG2细胞的增殖,且用药浓度为0.01mg/ml、作用时间24h(药物对细胞的抑制率在15%-25%)为最适合实验条件。(2)槲皮素与芹菜素可诱导人肝癌HepG2细胞的早期和晚期凋亡。(3)野艾蒿提取的5种单体化合物对HepG2细胞AMPKα1基因和蛋白表达均无明显作用;柚皮素、槲皮素和熊果酸可提高HepG2细胞内AMPKα2基因表达水平;5种单体化合物均使AMPKα2蛋白表达量升高。同时均可显著降低HepG2细胞内LPIN1基因和蛋白表达水平;5种单体化合物均可增加p-AMPK蛋白表达,提示均可激活AMPK磷酸化,使其活化。