叉头框(Forkhead box, FOX)转录因子家族基因广泛地分布于从酵母到人的各种真核生物中,构成一个庞大的转录因子家族,其中在哺乳动物中就拥有40个以上成员,分别参与细胞分化、增殖、代谢及细胞凋亡等生理过程的调节。FOX家族蛋白有19个亚族,共同特点是含有进化保守的、约100个氨基酸组成的叉状(Forkhead) DNA结合域(DNA-binding domain, DBD)。目前,有关FOX家族蛋白的功能及分子机制已逐步成为免疫学遗传学医学以及肿瘤学领域的研究热点。转录因子FOXA1属于FOX家族的FOXA亚家族,是FOX家族最早被克隆的成员。人的FOXA1基因含有472个氨基酸。它的功能区域分为转录激活区和DNA结合区。它的DNA结合域通过结合DNA,激活或抑制目的基因的转录活性,同时还能参与细胞信号转导细胞周期调控和新陈代谢的调节,在生物体发育及成熟的组织器官中均能发挥重要作用。FOXA1蛋白还可以和许多其它的蛋白发生相互作用。为确定转录因子FOXA1的互作蛋白,我们构建了FOXA1的原核表达载体,诱导表达并纯化后获得了人FOXA1的C端和N端蛋白片段,为寻找FOXA1的互作蛋白提供材料基础。本研究中,我们提取人乳腺癌细胞MCF7的总RNA,逆转录成cDNA,设计引物PCR克隆FOXA1的cDNA,再以此为模板扩增FOXA1的C端、N端cDNA片段,分别并克隆进带有GST标签的原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组表达质粒。双酶切及测序鉴定正确后,转化至大肠杆菌BL21 Rosetta DE3,经IPTG诱导,Glutathione Sepharose 4B亲和纯化,通过SDS-PAGE电泳及Western Blot确定FOXA1蛋白的表达。与MCF7细胞裂解液孵育,进行GST Pull Down试验,检测纯化蛋白与FOXA1已知互作蛋白TLE3的相互作用,表明纯化的重组蛋白可作为寻找潜在FOXA1互作蛋白的有效材料。