拟除虫菊酯的痕量检测及对映体的细胞毒性代谢组学研究

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拟除虫菊酯农药广泛用于农业生产和日常生活领域,直接或间接的暴露于人类和各种动植物中,有必要对其进行安全监控和毒性评估。本研究通过建立基于离子液体的分散液液分散法对检测复杂基质中的痕量菊酯农药,为其农残限量检测提供可靠的方法。手性菊酯农药的不同对映体有着不同的生物活性和毒性效应,其毒性评估问题受到了极大的重视,先前研究主要关注其水生生物的对映选择性毒性效应,而对人类的对映选择性毒性效应未能阐明。本文建立了基于超声辅助的离子液体分散液液微萃取-高效液相色谱法(IL-UA-DLLME)直接测定中药口服液中四种拟除虫菊酯的残留量。中药口服液包括了四磨汤、抗病毒和化积口服液。优化的萃取条件包括离子液体类型、离子液体体积、分散剂种类、分散剂体积以及超声辅助萃取的时间。四种菊酯的检出限(LODs)范围为 0.007-0.024 mg L-1,定量限(LOQs)范围为 0.023-0.080 mg L-1,回收率范围为80.1-106.4%。除此之外,本研究建立磁性辅助的原位离子液体分散液液微萃(UA-MIS-DLLME)的方法应用于天然椰子水中菊酯农药的测定。优化萃取的条件是离子交换剂的体积、液体的种类、离子液体的体积、Fe304磁性纳米粒子的用量、超声时间进行优化以及Fe304磁性纳米粒子的用量。三种菊酯农药的线性范围是0.5-50 mg L-1,相关系数范围为0.9994-0.9999、回收率达到84.8-100.6%的范围。本研究选择手性柱(Chiralcel OJ)在正相色谱条件下拆分联苯菊酯消旋体,通过Chiralcel OJ-H手性分析柱和C18柱对得到的手性对映单体分别进行光学纯度和浓度检测。将联苯菊酯(BT)手性对映体分别作用于人肝细胞系(L02)以评估其细胞毒性和代谢干扰。不同暴露浓度(5、10、20、40、80 μM)的BT联苯菊酯手性对映体作用于L02细胞,通过CCK-8酶活性检测其细胞活力的影响情况,结果表明在20、40、80 μM浓度下S构型的联苯菊酯细胞毒性显著高于R构型的联苯菊酯。利用UHPLC-TOF/MS方法在20 μM的条件下考察联苯菊酯手性对映体对L02细胞代谢干扰影响。获得的原始数据经主成分分析、正交偏最小二乘法判别分析、单变量分析以及层次聚类分析获得S构型的联苯菊酯和R构型的联苯菊酯分别有167和102个差异代谢物。相同浓度的S构型的联苯菊酯和R构型的联苯菊酯具有对映选择性。通路分析表明,S构型的联苯菊酯和R构型的联苯菊酯主要影响L02细胞中的10和6个途径,意味着联苯菊酯对映体诱导的通路干扰也具有对映选择性。针对不同的复杂基质,包括三种不同的中药口服液和天然椰子水分别建立了绿色简单的前处理富集方法适用于痕量的菊酯农药的检测,并且利用代谢组学技术研究联苯菊酯手性对映体对L02细胞代谢干扰的差异。
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