论文部分内容阅读
本实验通过采集广西各地临床上疑似猪瘟的组织病料,经RT-PCR方法鉴定为阳性后接种到PK15细胞,采用带毒传代的方法分离到两株猪瘟病毒GXGP03和GXLC15。对这两株进行全基因克隆并测序,GXGP03和GXLC15株全长分别是12295bp和12296bp。GXGP03和GXLC15经序列分析发现,与HCLV、Shimen株的同源性较低,为84.2%-85.5%；与Paderborn、GXWZ02株的同源性为94.2%-94.9%。进化树分析表明,GXGP03和GXLC15都属于Subgroup2.1,与Paderborn、GXWZ02属于同一个亚群,亲缘关系较近,与HCLV株、Shimen株亲缘关系较远,并且根据GXLC15和GXGP03株的全基因组及各个基因进行进化树的构建,发现Erns基因、NS3、NS4B、NS5A的进化树中显示的基因分群与全基因组、E2基因、NS5B进化树中的基因分群基本相似,故推测着几个基因可成为基因分群依据的潜在性基因。通过与HCLV、India疫苗株、Shimen. Shimen-HVRI、Paderborn、GXWZ02株的3’-UTR序列比较发现,GXGP03和GXLC153’-UTR与强毒株Shimen、Shimen-HVRI及中等毒力株Paderborn、GXWZ02株一样缺失14个碱基。将40株毒株与GXGP03株、GXLC15株的Erns、E2蛋白进行氨基酸序列比较。分析Erns、E2糖基化位点,发现不同亚群毒株的糖基化位点存在差异,主要存在在数量上的差异,这是否与毒株的毒力相关,需要进一步研究。分析GXLC15和GXGP03株的Erns氨基酸序列,发现第476位氨基酸位点都为为Ser,没有发生变异,表明了GXLC15和GXGP03以非乙酰硫酸肝素的方式在PK15细胞上增殖。动物实验表明,GXLC15和GXGP03株对猪具有明显的致病性,在临床症状上表现为皮肤出现出血点和出血斑、腹泻、体温升高等症状,剖检后发现脾脏边缘梗死并呈锯齿状、肠系膜淋巴结出血、肿胀、肾点状出血、膀胱点状出血、腹股沟淋巴结出血、切面呈大理石花纹样等猪瘟典型症状。应用定量PCR对GXGP03攻毒后猪的分泌物、排泄物、血清进行CSFV的检测,发现猪在感染第6天出现病毒血症,并且在感染后第6～10天,在分泌物和排泄物中检测到CSFV病毒,说明CSFV在攻毒后第6～10天开始排毒。通过实验分析CSFV毒株毒力的强弱与白细胞变化、体温变化、临床症状、排毒情况有关。本实验中GXGP03和GXLC15感染猪只后白细胞数量在第4天开始减少,抗体在第4～第10天迅速上升,抗体滴度超过1：1024,并且白细胞数量的减少和抗体滴度的升高总是出现在体温升高、产生病毒血症、皮肤出血等临床症状之前。攻毒后组织病理变化显示,GXGP03感染猪只后,产生严重病理变化的为脾脏和肺脏。根据动物实验的临床症状、病理变化、结合GXGP03和GXLC15的分子生物学特性可判断GXLC15和GXGP03株是中等毒力的毒株,病程呈亚急性经过。