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目的:1.考察芪胶升白胶囊及方中特色苗药血人参对环磷酰胺致小鼠白细胞降低的影响,为其临床应用提供实验依据。2.探讨芪胶升白胶囊对非特异炎症的抗炎作用,初步研究其辅助抗癌的机制。3.筛选血人参中的抗炎有效组分,为血人参的开发利用提供实验依据。 方法:1.采用环磷酰胺致小鼠白细胞降低模型,设立空白组、模型组、阳性对照组、药物组(芪胶升白胶囊和血人参提取物),灌胃给药18天后,摘眼球取血。用血细胞分析仪对小鼠血液进行血常规检测,对白细胞(含中性粒细胞百分比,淋巴细胞百分比)、红细胞、血小板的数量进行统计分析,通过与模型对照组以及阳性对照组之间的差异来评价芪胶升白胶囊以及血人参提取物对环磷酰胺致小鼠白细胞降低的影响。 2.分别采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、角叉菜胶致小鼠足趾肿胀、棉球致小鼠肉芽肿胀炎症模型,均设立模型组,阳性对照组,药物组(芪胶升白胶囊和血人参提取物),记录耳片重量、足趾厚度、肉芽重量,通过计算肿胀度以及肿胀抑制率来评价芪胶升白胶囊以及血人参提取物的抗炎作用。 3.利用绿色荧光蛋白(EGFP)标记巨噬细胞的转基因斑马鱼(zlyz-EGFP),通过切割尾部构建巨噬细胞聚集的炎症模型,以每组12条,每孔3条随机放入微孔培养板,分为模型组、阳性对照组、不同浓度药物组。利用荧光显微镜示踪巨噬细胞的炎症行为,对聚集在损伤区域的巨噬细胞数量进行统计分析。通过与模型组以及阳性对照组之间的差异来评价血人参提取物的抗炎药理作用。 4.采用致炎因子脂多糖(LPS)刺激细胞株RAW264.7,从而引起巨噬细胞的损伤,本实验通过观察血人参提取物的四个部位对LPS导致的巨噬细胞炎性损伤的保护作用,对细胞株RAW264.7生长状况的影响以及对NO释放量的检测来进行抗炎活性评价。 结果:1.①芪胶升白胶囊:与模型组相比:芪胶升白胶囊各剂量组白细胞、血小板具有显著性差异(P<0.01)。与地榆升白片组相比:芪胶升白胶囊高、中剂量组的白细胞、中性粒细胞百分比、淋巴细胞百分比、红细胞、血小板差异不明显。②血人参药材:白细胞数量与模型组相比:血人参提取物中石油醚层、乙酸乙酯层、正丁醇层各剂量组具有显著性差异(P<0.01),水层差异不明显;红细胞数量与模型组相比:石油醚层(高、中剂量)、乙酸乙酯(中、低剂量)、水层(高、低剂量)组具有显著性差异(P<0.01),其余组差异不明显;血小板数量与模型组相比:乙酸乙酯层(高、低剂量)、水层(高、低剂量)组具有差异(P<0.05);石油醚层各剂量组、乙酸乙酯中剂量、正丁醇各剂量组、水层中剂量组的血小板具有显著性差异(P<0.01),其余组差异不明显。 2.①二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验:肿胀度与空白组相比:芪胶升白胶囊各剂量组,血人参中石油醚层各剂量组、乙酸乙酯层各剂量组、正丁醇层(高、中剂量组)均具有显著性差异(P<0.01),其余药物组差异不明显。与阳性对照组相比:芪胶升白胶囊高、中剂量组,血人参正丁醇层高剂量组之间差异不明显。②角叉菜胶致小鼠足趾肿胀实验:致炎0.5~8h内的肿胀度与空白组相比:芪胶升白胶囊各剂量组,血人参石油醚层、乙酸乙酯层、正丁醇层之间均具有显著性差异(P<0.01),其余药物组差异不明显。与阳性对照组相比:芪胶升白胶囊高剂量组之间差异不明显。③棉球致小鼠肉芽肿实验:肉芽肿与模型组相比:芪胶升白胶囊各剂量组,血人参石油醚层、乙酸乙酯层、正丁醇层之间均具有显著性差异(P<0.01),其余药物组差异不明显。与阳性对照组相比:芪胶升白胶囊高、中剂量组,血人参石油醚层高剂量组之间差异不明显。 3.各组斑马鱼损伤部位的荧光数量和模型组相比:血人参中石油醚层(10~90mg/L),乙酸乙酯层(10~30mg/L)、正丁醇层(10~20mg/L)时具有显著性差异(P<0.01),其余药物组差异不明显。和阳性对照组相比:石油醚层(10~30mg/L),乙酸乙酯层(20mg/L)时差异不明显。此外,乙酸乙酯层和正丁醇层的浓度在50mg/L及以上浓度,石油醚层在100mg/L及以上浓度时出现斑马鱼死亡情况。 4.血人参提取物中石油醚层对LPS诱导损伤的细胞保护作用,和模型组相比,具有显著性差异(P<0.01)。其余各部位均没有差异。 结论:1.小鼠灌胃服用环磷酰胺后,白细胞、血小板、红细胞均不同程度的降低,给药后,芪胶升白胶囊,血人参不同极性提取物除水层外均能升高小鼠的白细胞、红细胞以及血小板数量;芪胶升白胶囊对小鼠白细胞、红细胞以及血小板升高程度和地榆升白片相当。 2.①芪胶升白胶囊与血人参中石油醚层、乙酸乙酯层、正丁醇层对二甲苯致小鼠耳廓肿胀具有抑制作用,其中芪胶升白胶囊高、中剂量组和血人参正丁醇层高剂量组的抑制作用和地塞米松相当。②芪胶升白胶囊与血人参中石油醚层、乙酸乙酯层、正丁醇层对小鼠足趾肿胀具有抑制作用,其中芪胶升白胶囊高剂量组与地塞米松组的抑制作用相当。③芪胶升白胶囊与血人参中石油醚层、乙酸乙酯层、正丁醇层对棉球所致的小鼠肉芽肿具有抑制作用,其中芪胶升白胶囊高、中剂量组和石油醚层高剂量组与地塞米松的抑制作用相当。血人参水层各剂量组对二甲苯致小鼠耳廓肿胀、角叉菜胶致小鼠足趾肿胀、棉球致小鼠肉芽肿胀均没有抑制作用。 3.血人参提取物中石油醚层、乙酸乙酯层、正丁醇层低浓度时对巨噬细胞向斑马鱼损伤部位迁移具有抑制作用,其中石油醚层和乙酸乙酯层的抑制作用和地塞米松相当;水层没有抑制作用。 4.血人参提取物中石油醚层对LPS诱导损伤的细胞具有保护作用。