论文部分内容阅读
目的：利用反相高效液相色谱法和非水反相高效液相色谱法，比较龙胆苦苷标准品与脂肝宁胶囊中、龙胆药材中龙胆苦苷在大鼠体内的药代动力学异同；比较脂肝宁胶囊中、虎杖药材中大黄素在大鼠体内的药代动力学异同；并比较龙胆苦苷在大鼠主要脏器中分布情况的异同；为脂肝宁胶囊临床用药方案的确定提供依据，为揭示脂肝宁胶囊作用机制的研究提供新思路。方法：建立反相高效液相色谱法快速测定大鼠血清中龙胆苦苷浓度的方法和非水反相高效液相色谱法测定样品中大黄素含量的检测方法并用于本试验研究中。大鼠分为龙胆苦苷实验组和大黄素实验组，一次灌胃给药，定时眼底静脉丛取血，肝素抗凝或不抗凝。龙肝苦苷实验组取血清，用三倍量甲醇沉淀蛋白，取上清液过滤，用反相高效液相色谱法测定龙胆苦苷血药浓度，以C18为固定相，流动相为乙腈-水（20﹕80），在270 nm波长处检测；大黄素实验组取血浆，30%H2SO4水解，乙醚提取，反相高效液相色谱法分析含量，以C18为固定相，流动相为甲醇-冰醋酸（99.9:0.1），在254 nm波长处检测。检测结果分别用3P97程序处理，拟合药时曲线。分别于吸收相、分布相和消除相选择一时间点，取主要脏器组织，匀浆；按血清处理方法处理组织样本后，用反相高效液相色谱法分析含量。另取大鼠分为虎杖药材组和脂肝宁胶囊组，一次灌胃给药，代谢笼饲养，分别收集粪、尿，乙醚提取，反相高效液相色谱法分析含量。结果：龙肝苦苷试验组 给大鼠灌胃龙胆苦苷标准品、含同样剂量龙胆药材提取物及脂肝宁胶囊后，动态血药浓度数据经药动学软件处理，药-时曲线均符合二房室模型。药动学参数：龙胆苦苷标准品组t1/2α/h 0.39±0.08、t1/2β/h 0.64±0.03、tmax/h 0.57±0.05、Cmax/μg·ml-1 6.16±1.17、AUC(0～∞) /μg·ml-1·h 10.7±2.3、CL(s) /L·h-1·kg-1 8.11±1.81；龙胆药材提取物组 t1/2α/h 0.77±0.28、t1/2β/h 1.00±0.14、tmax/h 1.09±0.14、Cmax/μg·ml-1 6.54±0.87、AUC(0～∞) /μg·ml-1·h 22.2±4.0、CL(s) /L·h-1·kg-1 4.05±0.80；脂肝宁胶囊组t1/2α/h 0.86±0.11、t1/2β/h 1.17±.20、tmax/h 1.13±0.10、Cmax/μg·ml-1 7.44±1.52、AUC(0～<WP=5>∞) /μg·ml-1·h 25.2±4.4、CL(s) /L·h-1·kg-1 3.34±0.73。龙胆苦苷标准品组与其他两组可见显著性统计学意义，而其他两组间却无显著性统计学意义；三组的药动学参数Cmax无显著性统计学差异。龙胆苦苷在脏器组织分布数据：龙胆苦苷进入体内后在组织中分布广泛，在小肠、肝、脾、肾、脂肪等脏器组织分布较多，有富集现象。龙胆药材组0.5h点在脂肪中为5.44±3.24(μg/g，μg/ml)；在肝组织中为21.9±17.2(μg/g，μg/ml)；龙胆药材组1.5h点在脂肪中为57.1±42.0*(μg/g，μg/ml)；在肝组织中为27.1±11.2*(μg/g，μg/ml)；在脾组织中为28.6±19.5*(μg/g，μg/ml)；龙胆药材组4h点在脂肪中为10.3±8.3*(μg/g，μg/ml)；在肝组织中为12.8±6.9(μg/g，μg/ml)；脂肝宁胶囊组0.5h点在脂肪中为36.4±28.4*(μg/g，μg/ml)；在肝组织中为18.5±9.6(μg/g，μg/ml)；脂肝宁胶囊组1.5h点在脂肪中为4.37±2.52(μg/g，μg/ml)；在肝组织中为14.0±3.4；在脾组织中为3.07±3.3(μg/g，μg/ml)；脂肝宁胶囊组4h点在脂肪中为0.498±0.580(μg/g，μg/ml)；在肝组织中为6.63±2.6(μg/g，μg/ml)。龙胆苦苷在脂肪、肝、脾、肾等组织中的分布有显著性差异，且龙胆药材中龙胆苦苷在组织中浓度要明显高于脂肝宁胶囊的分布浓度。大黄素试验组 大鼠灌胃分别给予含同样剂量大黄素的脂肝宁胶囊及虎杖药材提取物后，动态血药浓度数据经药动学软件处理，药-时曲线均符合二房室模型。药动学参数：虎杖药材提取物组V（d）2.75±0.16(L/kg)、t1/2α/h 0.21±0.03、t1/2β/h 8.58±1.00、tmax/h、 0.39±0.07、Cmax/μg·ml-1 1.35±0.08、AUC(0～∞) /μg·ml-1·h 5.93±0.75、CL(s) /L·h-1·kg-1 1.37±0.13；脂肝宁胶囊组V（d） 10.0±0.2(L/kg)、t1/2α/h 0.38±0.08、t1/2β/h 10.13±1.02、tmax/h、 0.55±0.04、Cmax/μg·ml-1 0.53±0.05、AUC(0～∞) /μg·ml-1·h 4.43±1.10、CL(s) /L·h-1·kg-1 1.82±0.17。其中V（d），t1/2α ，AUC(0～∞) ，CL(s)，Cmax参数有显著统计学意义。大黄素在粪尿中的数据 虎杖药材组12只大鼠粪便中大黄素的总含量在19.43±0.65μg之间，脂肝宁胶囊组大鼠粪便中大黄素的总含量在20.45±0.73μg之间。虎杖药材组12只大鼠尿样中大黄素的总含量在7.80±0.43μg之间；脂肝宁胶囊组大鼠尿样中大黄素的总含量在8.10±0.54μg之间。经统计学处理，二组间无显著性差异。结论：研究表明脂肝宁胶囊中龙胆苦苷、大黄素与龙胆、虎杖药材提<WP=6>取物中龙胆苦苷、大黄素在大鼠体内的药代动力学具有显著差异。与标准品相比，龙胆药材中的其他成分可直接影响龙胆苦苷的吸收，使龙胆苦苷的吸收增大，进入血中的龙胆药材中的其他成分对龙胆苦苷的清除也产生明显影响，脂肝宁胶囊复方与龙胆药材同样对龙胆苦苷的吸收产生了影响，但复方与药材之间无明显差别，说明复方中其他药物的?