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目的研究叶酸对局灶性脑梗塞大鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖、分化、凋亡作用的影响及加入U0126作用下叶酸对NSCs增殖、分化作用的影响,并探讨其机制,为研究叶酸防治脑梗塞疾病提供科学依据。方法选用SD成年雄性大鼠,正常条件下分组为:①假手术组(SO),灌胃生理盐水10ml/kg bw·d;②脑梗塞组(MCAO),灌胃生理盐水10ml/kgbw·d;⑧梗塞+低剂量叶酸组(MCAO+LFA),灌胃叶酸4mg/kgbw·d;④梗塞+高剂量叶酸组(MCAO+LFA),灌胃叶酸12mg/Kg bw·d;U0126条件下分组为:①DMSO对照组(DMSO);②U0126组(U0126):③梗塞+高剂量叶酸组(high folic acid,MCAO+HFA);④U0126+梗塞高剂量叶酸组(U0126+high folic acid,U0126+MCAO+HFA)。U0126组和U0126+MCAO+HFA鼠尾静脉注射U0126(0.5mg/kg)。除SO组外,其他组采用线拴法制作大鼠大脑中动脉栓塞模型(middle cerebral artery occlusion,MCAO),补充叶酸前、补充28d后及造模后7d,采用化学发光免疫法测定各组大鼠血清叶酸含量;进行脑组织光镜病理观察;利用免疫荧光双标记及Western Blot方法分别测定3,7及14d时间点叶酸对各组MCAO大鼠NSCs增殖及分化为星型胶质细胞(astrocyte,Ast)和神经元的影响。TUNEL法测定各组梗塞侧脑皮质内神经细胞的凋亡。结果灌胃前各组大鼠血清叶酸浓度差异无统计学意义(P>0.05);灌胃及造模后,MCAO+LFA组和MCAO+HFA组血清叶酸水平均高于SO组和MCAO组(P<0.05),MCAO+HFA组血清叶酸水平高于MCAO+LFA组(P<0.05)各组干预前后比较,叶酸干预组血清叶酸水平均高于补充前。脑组织病理学检查显示MCAO组脑皮质神经细胞体积缩小,染色加深,胞浆及胞核固缩,与MCAO组相比,MCAO+LFA组神经细胞固缩减轻,MCAO+HFA组脑组织病变改善明显,形态接近SO组。正常条件下叶酸干预组NSCs的增殖水平及分化为Asts和神经元水平高于MCAO组及SO组(P<0.05),且MCAO+HFA组高于MCAO+LFA组;U0126条件下,U0126+MCAO+HFA组NSCs增殖及分化程度低于MCAO+HFA组(P<0.05);MCAO+HFA组与DMSO组的比较U0126+MCAO+HFA组与U0126比较,组间差别均无统计学意义(P>0.05);U0126组NSCs增殖及分化程度低于DMSO组(P<0.05)。TUNEL凋亡结果显示:MCAO组和叶酸干预组细胞凋亡率均明显高于SO组(P<0.05),叶酸干预组细胞凋亡率均明显低于MCAO组(P<0.05),MCAO+HFA组细胞凋亡率低于MCAO+LFA组(P<0.05)。结论通过灌胃途径补充叶酸可以显著提高大鼠血清叶酸水平。叶酸能降低局灶性脑梗塞大鼠脑组织含水量,减缓脑组织间充质水肿,从而对局灶性脑梗塞大鼠起到保护作用。免疫荧光双标记及Western Blot结果显示,叶酸能有效促进局灶性脑梗塞大鼠NSCs的增殖,并促进NSCs分化为Asts和神经元。对于U0126条件下MCAO大鼠,U0126抑制叶酸诱导NSCs增殖及分化为Asts。提示叶酸可能通过MAPK通路起到促进NSCs增殖分化的作用。同时,叶酸能够抑制MCAO大鼠神经细胞的凋亡率。