社会的发展和环境的变化,导致了人们的生活节奏、饮食习惯和膳食结构都发生了巨大的改变,随之而来的健康问题,越来越成为人类担忧和研究的焦点。早在1948年,世界卫生组织(WHO)已经将肥胖定义为一种慢性代谢疾病,这种至今为止已经威胁到超过5亿人口的疾病,正在受到社会的关注。一方面,医药领域的科研工作者们正在努力寻找可以防治肥胖的复方药物,另一方面,人们也没有放弃利用一些天然食材保健养生,控制肥胖,改变不健康的状态。苦丁茶作为纯天然的代用茶饮料已经有两千多年的历史,其降脂减肥、清热解暑、抗菌消炎等功效也慢慢被证实和认可。本研究以冬青科苦丁茶中的苦丁茶冬青(Ilex kudingcha C. J. Tseng)为材料,从其多酚类物质中分离提纯了6种主要的活性成分——咖啡酰奎尼酸(CQA)类物质,建立了分离纯化及HPLC分析方法。探讨了CQA类物质对α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶及猪胰脂肪酶的抑制作用和对3T3-L1前体脂肪细胞增殖分化的影响,分别从糖代谢、脂代谢有关酶和细胞水平上讨论了CQA类物质的抗肥胖特性。最后,初步研究了苦丁冬青苦丁茶多酚对肠道微生态的调节作用。1、咖啡酰奎尼酸类物质的分离纯化。通过柱层析和半制备色谱从苦丁冬青苦丁茶(Ilex kudingcha C. J. Tseng)分离纯化得到6种咖啡酰奎尼酸(CQA)类物质产品,并采用TSKgel ODS-80 TsQA色谱柱和二极管阵列检测器(DAD),建立一种便捷、灵敏的分析苦丁冬青苦丁茶中CQA类物质的高效液相色谱分析方法。结果表明,通过半制备色谱可分离得到纯度95%以上的6种CQA类单体物质：3-CQA、4-CQA. 5-CQA、3,4-diCQA、3,5-diCQA 和 4,5-diCQA.色谱条件：TSKgel ODS-80 TsQA色谱柱,流动相为水-甲醇-5‰甲酸体系,梯度洗脱,流速0.5 mL/min,柱温40℃,检测波长326 nm。该方法在一定范围内有良好线性,相关系数为0.9992～0.9999,平均加标回收率为96.34%,相对标准偏差均小于3%。2、CQA类物质对酶活性的抑制作用。本文以苦丁冬青苦丁茶中的多酚类物质：6种咖啡酰奎尼酸单体为样品,从酶抑制的角度探讨苦丁茶降脂、抗肥胖的作用机理。建立以淀粉天青为底物的反应体系,测定CQA样品对α-淀粉酶活性的抑制效果,并分析其抑制类型。实验结果证明,6种CQA类物质的酶抑制效果明显,其中抑制活性最强的3,5-diCQA的IC50达到02842 mg/mL。以PNPG为反应底物,建立测定CQA样品对α-葡萄糖苷酶抑制作用的研究体系,6种样品对葡萄糖苷酶的抑制效果比较为：4,5-diCQA> 5-CQA> 3,4-diCQA> 3.5-diCQA> 4-CQA> 3-CQA,并且通过绘制Lineweave-Burk曲线,确定了6种CQA类物质对α-葡萄糖苷酶的抑制作用均为非竞争性抑制。以对硝基苯基月桂酸酯(pNP laurate)为反应底物,测定CQA样品对猪胰脂肪酶抑制作用,6种样品对葡萄糖苷酶的抑制效果比较为3,5-diCQA>4,5-diCQA> 3,4-diCQA> 3-CQA> 4-CQA> 5-CQA,通过绘制Lineweave-Burk曲线,确定了6种CQA类物质对猪胰脂肪酶的抑制作用均为非竞争性抑制。3、CQA类物质对3T3-L1前体脂肪细胞增殖、分化的影响效果。分别采用苦丁荼冬青苦丁茶中分离得到的6种CQA类物质为样品,研究这些单体对3T3-L1前体脂肪细胞的影响。首先,通过MTT法,测定了6种样品在24h、48h和72h对细胞增殖的影响,同时确定了无细胞毒性的加样浓度：50 μg/mL左右。使用胰岛素、IBMX和DEX共同诱导细胞分化,并设定实验组和空白对照组。观察结果证实,CQA类物质对3T3-L1细胞的分化有明显的抑制效果,并且这种抑制作用具有一定的剂量依赖性。4、苦丁茶多酚对肠道微生态调节作用的初步研究。以苦丁冬青苦丁茶水提物、多酚提取物及3,5-diCQA单体为试验样品,通过体外模拟人体肠道厌氧环境,对粪样中微生物群进行混合培养,并使用荧光原位杂交技术对菌群结构变化进行研究比较。结果显示,添加了三种样品的培养基中,有益菌双歧杆菌的数量在36h内得到了一定的增长。另外,使用HPLC分析方法,对培养过程中短链脂肪酸(SCFA)的含量进行监控。分析数据显示,与对照组相比,实验组的甲酸、乳酸、乙酸和丙酸含量都在0至36/48 h内呈升高趋势。说明,苦丁冬青苦丁荼能够对改善人体肠道微生态、调节肠道平衡起到一定的作用。但其机理有待进一步细致、系统的研究。