【摘 要】
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作为五大类经典的植物激素之一,ABA(Abscisic Acid)不仅能够参与调控植物的生长发育,也在调控植物对各种胁迫,尤其是非生物胁迫的响应中起着至关重要的作用。ABA作用的发挥需要通过信号转导来实现,ABA通过信号转导,调控下游响应基因的表达,进而调控植物的生长发育和植物对非生物胁迫的响应。DUF538(Domain of unknown function 538)蛋白家族含功能未知结构域,
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作为五大类经典的植物激素之一,ABA(Abscisic Acid)不仅能够参与调控植物的生长发育,也在调控植物对各种胁迫,尤其是非生物胁迫的响应中起着至关重要的作用。ABA作用的发挥需要通过信号转导来实现,ABA通过信号转导,调控下游响应基因的表达,进而调控植物的生长发育和植物对非生物胁迫的响应。DUF538(Domain of unknown function 538)蛋白家族含功能未知结构域,已有研究结果发现其家族中SVBs(Smaller trichomes with variable branches)亚家族基因的表达受到ABA的调控,能够参与调控拟南芥的生长发育及表皮毛的发生。而与SVBs亚家族最为相近的蛋白亚家族是DPS1(DUF538 proteins related to SVBs 1)、DPS2和DPS3,但其功能尚未见报道。利用半定量RT-PCR检测50μM ABA处理4小时的拟南芥野生型Col,结果表明,基因DPS1和DPS2的表达受ABA诱导,而DPS3基因在ABA处理后表达水平没有明显变化。而在180 m M Na Cl处理植物4小时后,发现盐处理能够抑制DPS1和DPS3基因的表达,但促进DPS2基因的表达。进一步研究发现,DPS1,DPS2和DPS3基因在检测的拟南芥花序、角果、茎生叶、茎、莲座叶、根、幼苗中均能够表达。通过构建p UC19-DPSs-GFP载体并进行原生质体瞬时转染实验,发现DPS1、DPS2和DPS3在细胞核中均有定位。通过构建p UC19-GD-DPSs载体并进行转录活性鉴定,证明DPS1、DPS2和DPS3均具有转录抑制活性。考虑到只有DPS2基因的表达同时受到ABA和盐胁迫诱导,可能参与调控拟南芥对ABA及盐胁迫的响应,因此通过构建基因编辑突变体和过表达转基因植物对其功能进行研究。最终构建获得了DPS2基因2个株系的CRISPR/Cas9基因编辑突变体dps2-c1和dps2-c2,以及2个株系的纯合过表达转基因植株35S:DPS2#3和35S:DPS2#7,发现其与野生型Col没有明显的形态差异。种子萌发和绿苗率实验结果表明,在ABA处理条件下,两个DPS2基因编辑突变体种子萌发率及幼苗绿苗率与野生型相比差异并不明显,但35S:DPS2过表达转基因植物种子萌发率及幼苗绿苗率均显著低于野生型,说明DPS2正向调控拟南芥对ABA的响应。而在盐胁迫条件下,上述两个突变体株系种子萌发率、幼苗绿苗率及成苗存活率与野生型相比均没有显著差异,但35S:DPS2过表达转基因植物种子萌发率、幼苗绿苗率及成苗存活率均显著低于野生型,说明DPS2负向调控拟南芥对盐胁迫的耐受性。综上所述,研究结果表明DPS1和DPS2是ABA响应基因,DPS1、DPS2和DPS3的表达受到Na Cl的影响,DPS1、DPS2和DPS3在细胞核中均有定位且均具有转录抑制活性,DPS2能够正向调控拟南芥对ABA的响应,但负向调控拟南芥对盐胁迫的耐受性。
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