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目的:胚胎成功植入依赖于子宫内膜与胚胎之间的同步发育,二者同步化的真正物质基础是蛋白质。本研究运用蛋白质组相关技术,分析妊娠早期人胚胎绒毛和子宫蜕膜组织蛋白质组,从蛋白质整体水平探索胚胎植入的分子机制。方法:1、收集正常妊娠第6～10周人工流产的胚胎绒毛和子宫蜕膜组织,分别于-80℃冻存。2、双向凝胶电泳(2-dimensional gel electrophoresis, 2-DE )分别分离绒毛和蜕膜组织蛋白质,考马斯亮蓝染色后,用PDQuest软件进行图像分析。3、对12个差异表达蛋白点用胰酶进行胶内酶切,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析酶切片断,得到肽质量指纹图(PMF),使用国际互联网上Matrix Science公司提供的PMF鉴定程序(Mascot: Peptide Mass Fingerprint)进行查询,每个查询得到一个分值(Mowse Score),根据分值计算概率来评价每个检索结果。通常可接受的域值是:一个事件随机发生的概率小于5%,则该事件为有意义(p<0.05)。4、运用RT-PCR、Western Blot和免疫组织化学技术,进一步分析和验证ANXA1mRNA和蛋白质在妊娠早期绒毛和蜕膜组织中的表达情况。结果:1、2-DE图谱显示,妊娠早期正常绒毛和蜕膜组织蛋白质分子量(Mw)主要集中在18.4~116 kDa范围内,等电点(pI)主要分布在pH 4.0~7.0之间。PDQuest软件分析图像,测得正常绒毛和蜕膜组织凝胶的匹配率为45%。正常绒毛和蜕膜组织蛋白点分别约为680个和621个,大约60个蛋白点在二者间有3倍以上的量变,其中约33个蛋白点在正常绒毛组织中的表达量高于正常蜕膜组织3倍以上,27个蛋白点在正常蜕膜组织中的表达量高于正常绒毛组织3倍以上。2、从60个差异表达的蛋白点中随机选取12个进行MALDI-TOF-MS鉴定,经数据库查询,7个蛋白点获得了有意义的结果(p<0.05)。分别为膜联蛋白A1(Annexin A1,ANXA1)、热休克蛋白90β(Heat shock protein 90 kDa beta,HSP 90β)、载脂蛋白A-1前体(Apolipoprotein A-I precursor,APOA1)、波形蛋白(Vimentin,VIME)、膜联蛋白A5(Annexin A5,ANXA5)、原肌凝蛋白4(Tropomyosin-4,TPM4 )、蛋白质二硫键异构酶A3前体(Protein disulfide-isomerase A3 precursor,PDIA3)。3、在12个差异候选蛋白点中,有5个蛋白点在正常绒毛组织中有较高表达,7个蛋白点在正常蜕膜组织中有较高表达。4、RT-PCR结果显示,正常绒毛组织ANXA1mRNA表达明显高于正常蜕膜组。Western Blot分析ANXA1蛋白质的表达,结果与RT-PCR一致。免疫组织化学分析结果显示,正常绒毛组织中ANXA1免疫染色黄褐色阳性物质分布广泛,特别是在绒毛干滋养层细胞中,胞浆浓染。正常蜕膜组织也有ANXA1免疫染色阳性物质积聚,分布在上皮细胞和蜕膜细胞的胞浆中,染色比正常绒毛组织浅。结论:胚胎植入涉及诸多蛋白质分子的参与以及蛋白质间的相互作用。本实验从妊娠早期胚胎绒毛和子宫蜕膜组织差异蛋白质组的研究中获得初步结果,并鉴定出7个有意义的蛋白,分别是膜联蛋白A1、膜联蛋白A5、原肌凝蛋白4、热休克蛋白90β、载脂蛋白A-1前体、波形蛋白和二硫键异构酶A3前体。这些蛋白质在胚胎植入过程中可能发挥着重要的作用。