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芒果是一种重要的热带水果。炭疽病是危害芒果最严重的病害之一,在全球范围内普遍发生,其中胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides(Penz.)Penz.&Sacc.)是芒果炭疽病的主要病原菌。本实验以胶孢炭疽菌作为研究对象,在前期研究中对产孢量较少的胶孢炭疽菌菌株进行了转录组测序,通过生物信息学分析筛选到一个氨基酸转运蛋白AAP家族的基因,命名为CgAAP,对其功能进行了初步的研究。得到以下结果:本研究通过PCR及RT-PCR技术扩增了CgAAP的DNA序列及cDNA序列,经测序后对该序列分析显示,CgAAP基因全长1858 bp,有4个内含子,cDNA全长1593 bp。CgAAP基因编码一个530个氨基酸的多肽,分子量约为57.1 kD,等电点pI为6.24,是一个中性蛋白,含有氨基酸渗透酶结构域。为了研究CgAAP基因的功能,构建了CgAAP基因的敲除载体pCB1532-CgAAP和过表达载体CgniaD-ToxA-GFP-CgAAP、互补载体pBARGPE1-Hygro-CgAAP,将敲除载体和过表达载体通过PEG介导转化的方法转化到胶孢炭疽菌野生型原生质体中、互补载体pBARGPE1-Hygro-CgAAP转化到胶孢炭疽菌CgAAP基因敲除突变体转化子的原生质体中,通过氯嘧磺隆/潮霉素抗性筛选及转化子鉴定,得到敲除突变体转化子(ΔCgaap)、互补突变体转化子、过表达突变体转化子。研究结果表明,野生型菌株(WT)的生长速度与互补突变体转化子的基本一致,过表达突变体转化子的生长速度快于其他三种转化子,敲除突变体转化子(ΔCgaap)的生长速度稍慢于野生型菌株与互补型菌株。同时比较PDB培养基中摇菌,PDA培养基中培养条件下的孢子产量,敲除突变体菌株(ΔCgaap)的产孢量均低于其他三种转化子,过表达突变体转化子的孢子产量最多,说明CgAAP参与调控胶孢炭疽菌的产孢过程。进一步研究发现,ΔCgaap对氧化胁迫耐受抑制的强度明显高于WT和过表达突变体,但是,互补突变体在含有20 mM浓度的PDA中时培养6 d生长受到完全的抑制,可能是因为互补了CgAAP基因的部分功能的同时也破坏了一部分功能,说明CgAAP参与调控胶孢炭疽菌的氧化胁迫反应。ΔCgaap的致病力也显著降低。在不划伤菌丝及划伤菌丝18h处理时的ΔCgaap中CgAAP基因的表达量均接近0,不划伤菌丝时过表达突变体转化子中CgAAP基因的表达量为WT的80倍,划伤菌丝18h处理时的ΔCgaap中CgAAP基因的表达量为WT的12倍,不划伤菌丝时互补突变体转化子中CgAAP基因的表达量与WT相近,划伤菌丝18h处理时的互补突变体转化子中CgAAP基因的表达量为0.01,可能是因为进行CgAAP基因互补之后,回补了该基因的部分功能,而互补突变体菌丝在受到划伤处理时的应激反应受到了损伤,在划伤之后的菌株该基因基本不表达。