败血症是一种全身性的炎症反应,其发病率和死亡率都比较高。目前对败血症的治疗主要采用抗菌治疗,但因为有时不能准确地诊断出致病菌,所以该治疗手段存在一定的局限性。利用抗炎性药物实行的免疫治疗能够阻断败血症患者的剧烈炎症反应,被认为是有效的治疗手段。然而,由于对败血症的长期性炎症反应及其调控机制缺乏有效的研究,这种免疫治疗手段还没有达到预期的治疗效果。从GEO数据库中检索发现,在败血症感染性休克儿童的血液样本中,GPR84呈现出高表达,这提示GPR84可能在败血症这一疾病中发挥了一定的调控作用。游离脂肪酸受体GPR84(G-protein coupled receptor 84)是游离脂肪酸受体家族的成员,并含有7次跨膜蛋白结构,也是一种G蛋白偶联受体。研究发现,Gpr84参与促进炎症反应,并且通过调控巨噬细胞的功能介导炎症反应。在小鼠中,Gpr84在LPS刺激的骨髓巨噬细胞中高表达。在RAW264.7细胞中,Gpr84的激活剂能够通过激活Gpr84增强脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的IL-12βp40的表达。为研究Gpr84是否参与调控败血症这一疾病,本论文进行了以下的实验研究:在本实验前期研究中,利用CRISPR/Cas9技术构建Gpr84敲除小鼠,通过对小鼠基因进行DNA测序分析,发现敲除小鼠的Gpr84基因的一个外显子中共敲除172bp长度的碱基序列。对小鼠骨髓巨噬细胞的Gpr84的mRNA和蛋白的表达量进行分析,发现在Gpr84-/-小鼠的骨髓巨噬细胞中Gpr84均不表达。因而Gpr84敲除小鼠构建成功,为后续从体外细胞水平和体内水平研究Gpr84对败血症的调控作用奠定了基础。通过腹腔注射LPS构建小鼠败血症模型,从机体水平研究Gpr84对败血症的调控作用。结果显示,Gpr84敲除的败血症小鼠存活率明显高于野生型败血症小鼠。Gpr84敲除后,败血症小鼠的血清中TNF-α、IL-6和IL-12βp40的表达明显低于野生型小鼠。在败血症模型中,Gpr84敲除小鼠的腹腔液中IL-6和IL-12βp40的表达量也低于野生型小鼠。随后从野生小鼠和Gpr84敲除小鼠体内提取骨髓细胞体外诱导分化为骨髓巨噬细胞以及提取腹腔巨噬细胞,进行体外细胞实验。利用RT-PCR和Q-PCR等方法分析了游离脂肪酸受体Gpr84在小鼠骨髓巨噬细胞和腹腔巨噬细胞的表达量,结果发现,在细胞受到LPS刺激时,与游离脂肪酸受体家族其它受体相比,Gpr84呈高表达,这一结果与Wang J等人的研究结果相一致。接着检测在LPS刺激条件下,Gpr84在巨噬细胞中发挥的调控作用,以及通过巨噬细胞对炎症的调控作用。结果显示,与野生小鼠相比,Gpr84敲除小鼠来源的骨髓巨噬细胞和腹腔巨噬细胞,在受到LPS刺激时,细胞中促炎症相关的细胞因子TNF-α、IL-6、IL-12αp35和IL-12βp40的转录表达量降低。Gpr84敲除后,骨髓巨噬细胞受LPS刺激后其吞噬细菌能力下降。Gpr84对腹腔巨噬细胞的吞噬细菌的能力没有显著性影响。Gpr84敲除与否不影响LPS刺激时巨噬细胞中趋化因子的转录表达,也不影响LPS诱导的巨噬细胞迁移能力。综上所述,Gpr84能够参与促进炎症反应,主要通过增强LPS诱导的巨噬细胞中促炎症应子如TNF-α、IL-6和IL-12βp40的转录表达,从而加剧炎症反应。Gpr84敲除后能降低败血症小鼠血清中促炎症因子TNF-α、IL-6和IL-12βp40及腹腔液中IL-6和IL-12β p40的表达量,减轻小鼠体内炎症反应,提高败血症小鼠存活率。本论文为研究以Gpr84作为可能的药物靶点提供新的理论基础。