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根据国内外已发表的PERV囊膜基因的核苷酸序列,设计并合成了扩增PERV-env全基因及其编码穿膜蛋白PERV-TM(gp15)和外膜蛋白PERV-SU(gp70)基因的引物.应用PCR的方法从已建立的含有PERV-env全基因序列的质粒(pT-e6重组子)中扩增得到PERV-env全基因及其编码穿膜蛋白PERV-TM和外膜蛋白PERV-SU基因,并克隆入pGEM-T载体,经蓝白斑筛选、双酶切及PCR鉴定,获得PERV-env全基因及其编码穿膜蛋白PERV-TM和外膜蛋白PERV-SU基因克隆重组质粒pGEM-env、pGEM-TM和pGEM-SU.从克隆重组质粒上切下目的基因片段,与表达载体连接,构建重组表达质粒pGEX-env.利用原核表达载体与PCR扩增得到的PERV-TM和PERV-SU基因连接,成功构建了原核表达载体pGEX-TM和pGEX-SU.经ABI377自动序列分析仪进行全序列测定,测定结果显示其具有正确的读码框.将阳性重组质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,应用IPTG对筛选出来的阳性重组表达质粒进行诱导表达,并对表达的融合蛋白进行鉴定.重组PGEX-TM蛋白的成功表达将为下一步制备重组蛋白的多克隆抗体作好充分的准备.表达的PGEX-TM融合蛋白具有良好的抗原性和特异性,为从分子水平上对PGEX-TM蛋白的功能性研究和发展PERV基因工程检测试剂奠定了基础.