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目的:通过动态观察大鼠脑缺血再灌注损伤后丝/苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)、半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶9(caspase9)、半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3(caspase3)蛋白表达变化,探讨重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)的神经保护作用机制。方法:74只成年雄性SD大鼠,随机分为四组假手术组(SO组)、模型组(MG组)、治疗组(TG组)、观察组(OG组)。采用longa线栓法制作大脑中动脉闭塞再灌注模型(MCAO/R),TG组于再灌注时及之后每6小时腹腔注射50ug/kg rhG-CSF,MG组和SO组同时间给予等量的生理盐水,采用longa5分制法行神经功能缺损评分,光镜下观察缺血区病理学变化,运用免疫组化及western blot蛋白印迹测定p-AKT、caspase9、caspase3蛋白表达,用原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测细胞凋亡情况。结果:1、再灌注24h时,SO组未见神经功能缺损,MG组神经功能缺损评分[2(1.25)]高于TG组[1(0.25),p=0.022];免疫组化及western blot测定p-AKT、caspase9蛋白表达结果一致,与SO组相比,MG组和TG组p-AKT、caspase9蛋白表达均增加(p<0.01),TG组p-AKT蛋白表达较MG组升高(p<0.01),MG组caspase9蛋白表达比TG组升高(p<0.01);SO组偶见凋亡细胞,MG组凋亡细胞比例[(31.80±2.91)%]较TG组[(22.13±2.74)%]显著增多。2、OG组:再灌注后不同时间点(2h、6h、24h、48h、72h)p-AKT、caspase9及caspase3蛋白表达不同。结论:大鼠大脑中动脉闭塞再灌注损伤后,不同时间点p-AKT、caspase9、caspase3表达不同,且rhG-CSF对神经细胞有保护作用,其机制可能是通过升高p-AKT、降低caspase9的表达实现的。