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第一部分鼻分泌物中骨膜蛋白在过敏性鼻炎中的临床应用价值【目的】检测并比较过敏性鼻炎(AR)患者与健康对照鼻分泌物中嗜酸粒细胞(EOS)指数、嗜酸粒细胞阳离子蛋白(ECP)和骨膜蛋白的浓度;分析三种因子与AR患者症状严重程度的相关性;分析比较ECP和骨膜蛋白在辅助诊断AR中的价值。【方法】收集AR患者和健康对照鼻黏膜,进行RNAseq后分析差异基因,筛选差异基因。收集AR患者和健康对照的鼻分泌物,瑞氏-吉姆萨染色法检测EOS,ELISA法检测ECP与骨膜蛋白浓度。分析这三种因子在AR患者与健康对照中的浓度差异及三者的相关性。Spearman检验分析三种因子浓度与AR患者症状严重程度的相关性。绘制ECP、骨膜蛋白和ECP联合骨膜蛋白辅助诊断AR的受试者工作曲线。【结果】共收集了7名AR患者和7名健康对照的鼻黏膜,经RNAseq分析后,AR相较健康对照共有1205个基因上调,880个基因下调。筛选出骨膜蛋白后,又收集30名健康对照和121名AR患者鼻分泌物和基本信息。AR患者鼻分泌物中EOS指数、ECP以及骨膜蛋白的中位数分别是1.3、52.92μg/m L和32.47 ng/m L均高于健康对照的结果(EOS指数、ECP以及骨膜蛋白分别为0、2.28μg/m L和7.44 ng/m L)。ECP分别与EOS指数和骨膜蛋白浓度有中度正相关性,EOS指数与骨膜蛋白有低度正相关性。EOS指数、ECP和骨膜蛋白浓度高低与AR患者症状严重程度无相关性。ECP、骨膜蛋白及ECP联合骨膜蛋白辅助诊断AR的截断值分别为11.80μg/m L(灵敏度:81.80%;特异度:96.70%)、18.20 ng/m L(灵敏度:68.60%;特异度:80.00%)和105.50(灵敏度:84.30%;特异度:96.67%)。【结论】AR患者鼻分泌物中EOS、ECP与骨膜蛋白浓度均高于健康对照;其浓度高低与鼻部症状严重程度均无相关性;ECP联合骨膜蛋白作为辅助诊断AR患者的客观指标具有较高的灵敏度与特异度。第二部分儿童不同类型鼻炎中鼻腔局部炎症客观指标初探【目的】分析比较儿童不同类型鼻炎鼻分泌物中IL-6、IL-8、髓过氧化物酶(MPO)、嗜酸粒细胞阳离子蛋白(ECP)和骨膜蛋白的浓度差异以及这些因子的临床应用价值。【方法】收集健康对照、AR以及CRS鼻黏膜,进行RNAseq后分析差异基因,筛选出差异基因。收集儿童AR、CRS伴过敏、CRS以及急性鼻炎的鼻分泌物,检测并分析IL-6、IL-8、MPO、ECP及骨膜蛋白的浓度差异。Spearman分析鼻分泌物中IL-6、IL-8、MPO、ECP和骨膜蛋白浓度之间的相关性。主成分分析IL-8、MPO、ECP及骨膜蛋白在区分不同类型鼻炎的价值。【结果】共收集7名健康对照,7名AR和5名CRS患者的鼻黏膜,经RNAseq分析后,CRS相较健康对照共有1155个基因上调,600个基因下调,相较AR共有1068个基因上调,825个基因下调。共收集175例儿童患者(急性鼻炎29例,CRS伴过敏38例,CRS 66例,AR 42例)的鼻分泌物。急性鼻炎鼻分泌物中IL-6浓度高于其它三组。CRS伴过敏和CRS患者鼻分泌物中IL-8最高,其次为急性鼻炎,AR患者最低。CRS患者鼻分泌物中MPO浓度最高,其次是急性鼻炎、CRS伴过敏,AR患者最低。ECP在4组中区分度不明显。骨膜蛋白主要在AR患者中检出,其余三组呈低水平。IL-8与MPO两者的相关系数为0.870,成高度正相关性。ECP与IL-8成低度正相关性(r=0.487),与MPO成中度正相关性(r=0.528)。骨膜蛋白与IL-8成低度负相关性,相关系数为-0.477,与MPO成中度负相关性,相关系数为-0.500。主成分分析结果可见AR患者能被区分出。【结论】IL-6主要在急性鼻炎中升高。IL-8和MPO在CRS伴过敏,CRS及急性鼻炎中升高。ECP在AR、CRS伴过敏、CRS和急性鼻炎中区分度不明显。骨膜蛋白主要在AR患者中检出。联合上述因子分析可明显区分出AR患者。第三部分鼻分泌物中嗜酸粒细胞阳离子蛋白和髓过氧化物酶水平与鼻细胞学的相关性及其临床应用【目的】本实验探讨了嗜酸粒细胞阳离子蛋白(ECP)联合髓过氧化物酶(MPO),即ECP/MPO,在鼻腔分泌物中诊断鼻腔局部炎症的价值。并评价ECP/MPO与鼻细胞学的相关性。【方法】收集过敏性、感染性和非感染非过敏性鼻炎以及健康对照的鼻分泌物,观察其鼻细胞学。根据鼻细胞学将患者分为嗜酸粒细胞(Eos)为主型(Eos>50%),中性粒细胞(Neu)为主型(Neu>90%),Eos/Neu混合型(10%<Eos<50%)和低炎症型。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)和胶体金免疫色谱方法检测鼻分泌物中的ECP和MPO。计算ECP和MPO的最佳截断值,并比较ECP/MPO和鼻细胞学的相关性。同时评估了ECP/MPO用于区分各种鼻部炎症的灵敏度和特异度。【结果】本实验共纳入337名志愿者(67名健康对照和270名鼻炎患者)。其中ECP区分嗜酸粒细胞性炎症的截断值为4.52μg/m L。MPO区分中性粒细胞性炎症的截断值为13.03μg/m L。通过ELISA方法检测的ECP/MPO诊断嗜酸粒细胞性炎症(Eos>50%)的灵敏度和特异度分别为87.39%和90.00%。胶体金方法的结果分别为82.88%和89.50%。ELISA方法检测ECP/MPO辅助诊断中性粒细胞性炎症(Neu>90%)的灵敏度和特异度分别为91.35%和82.40%。胶体金方法的结果分别为95.19%和77.25%。【结论】ECP/MPO可作为区分鼻腔局部炎症的良好客观标志物。其中胶体金方法检测ECP/MPO具有较高的灵敏度和特异度,由于其简单和快速,具有可广泛用于常规临床诊断的潜力。