多功能Bt菌株的筛选及Bt96519-1功能基因的分析

来源 :南开大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wulaixiaosheng
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
为了扩大苏云金芽孢杆菌的杀虫谱及生防范围,通过抑真菌和杀虫生物活性测定,从20株几丁质酶活性比较高的Bt菌株中筛选到一株广谱抑真菌并对甜菜夜蛾高效的菌株Bt96519-1。研究了该菌株的抑制真菌孢子萌发活性、菌体及伴孢晶体显微形态、cry基因型等特征并在大肠杆菌中克隆了其参与杀虫和抑真菌的活性物质的编码基因:chiB、vip3A、cry1Ac。   利用对峙法检测了20株Bt菌株的抑真菌活性,通过比较抑菌圈的大小,从中筛选出6株抑菌效果较强的菌株。这6株Bt菌株对8种供试植物病原真菌菌丝生长有不同程度的抑制作用,且对某些真菌的抑制效果能达到3个“+”。通过杀虫生物活性测定从这6株菌株中筛选出两株对棉铃虫、甜菜夜蛾都有较高毒性的96519-1和96519-11菌株。本室的高毒菌株15A3作为生测参比菌株。15A3、96519-1、96519-11对棉铃虫的半致死浓度(LC50)依次为7.8μg/mL、12.8μg/mL、9.2μg/mL,对甜菜夜蛾的半致死浓度(LC50)依次为18.2μg/mL、5.5μg/mL、7.1μg/mL。目前已报道对棉铃虫高效的Bt菌株很多,但对甜菜夜蛾高效的却很少。15A3是公认的对棉铃虫、甜菜夜蛾都很高效的专利菌株,96519-1对甜菜夜蛾的毒力比15A3提高了近3倍。使用杯碟法检测96519-1对供试8种真菌孢子萌发的抑制作用,发现其能完全抑制这些真菌孢子的萌发。因此,96519-1是一株广谱抑真菌并对甜菜夜蛾高效的多功能生防菌株,已完成专利申请。   将在LB培养基上分别培养了8h和72h的96519-1制成涂片,在显微镜下观察其菌体及伴孢晶体形态发现:处于营养生长期的96519-1的菌体呈杆状,一般都是两两连在一起;会形成椭圆形、正方形、菱形及不规则形的晶体。经PCR-RELP分析以及特异引物PCR检测,证明该菌株含有6种杀虫蛋白基因:cry1Aα、cry1Ab、cry1Ac、cry1I,、cry2、vip3A和一种几丁质酶基因chiB。经SDS-PAGE分析,96519-1菌株分别产生分子量大约为135kD、130kD、80kD、65kD、60kD的几种杀虫晶体蛋白,这与对其检出的cry基因型是一致的。   在大肠杆菌XL-Blue中克隆、表达了96519-1编码几丁质酶B基因chiB。通过硫酸铵沉淀,得到ChiB粗蛋白,进行SDS-PAGE电泳分析,发现分子量约为64kD。使用杯碟法检测ChiB粗酶对真菌孢子萌发的抑制作用,发现其在一定的酶活条件下对真菌孢子萌发有明显的抑制作用。   经对96519-1菌株vip3A基因(登录号为Eu541373)测序及序列比对发现:与最相近的vip3A基因存在5个碱基和4个氨基酸的差异。可见96519-1的vip3A基因是个比较新型的基因。
其他文献
请下载后查看,本文暂不支持在线获取查看简介。 Please download to view, this article does not support online access to view profile.
  本文在对国外科技服务规则形成背景、科技伦理与社会责任、科技服务质量规则等主要内容进行了梳理和分析的基础上,结合北京科技服务业发展现状,对北京制定科技服务规则的必
  针对技术预测评价中依靠德尔菲调查等定性判断的不足,提出综合文献计量和专家智慧,实现技术预测的定性分析与定量分析相结合。以深水钻井平台动力定位技术为例,利用Citespac
辅酶Q10是人体中必需的一种醌类物质,它定位在细胞呼吸链上的黄素蛋白与细胞色素b之间,在细胞呼吸链上起重要的作用。辅酶Q10是细胞中天然的抗氧化物质,具有消除自由基、提高机
  美国国家纳米技术战略计划是美国政府为在21世纪继续保持其经济上的领导地位和国家安全,确保美国在纳米技术这一重要研发领域的进步与应用,同时解决当前和今后纳米技术应用
本文具体分析了淮河防洪与河道整治、行蓄洪区调整、水资源与水污染调度、淮河与洪泽湖关系(河湖关系)研究、淮河基本规律研究所提出的研究课题和利用淮河模型研究及解决这些
在我国东北部寒区,冬季的降雪在地面形成一定厚度的积雪层。积雪融化后形成的淡水是春季非常紧要的水资源,对人们的生产、生活、耕种具有极其重要的意义。然而,随着春季到来,
骨髓间充质干细胞移植作为治疗心肌缺血的治疗手段受到越来越多的关注,但是由于心肌梗死部位没有血液和氧气供应,不适合细胞存活,移植的干细胞尚未生长和分化便在数小时或一天内
  为了正确分析和全面了解北京国际科技合作现状及特点,运用超网络理论,以美国专利商标局申请库中公开的北京国际科技合作专利为数据源,阐述北京国际科技合作超网络模型的结构
会议
本文根据一维非恒定流基本方程组、河网节点连接方程及边点方程,联立成感潮河网水动力学模型;按preissmann四点带权差分格式进行离散,采用三级联解法,将模型方程分成微段、河段、