基于GABA能传导系统探讨固本健脑液对老年失眠大鼠的作用

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目的:观察固本健脑液对老年失眠模型大鼠行为学、脑电肌电以及相关指标蛋白的影响,阐明固本健脑液基于GABA能传导系统对于老年失眠的抑制性保护作用及机制,为固本健脑液临床上的使用提供实验依据和理论指导。方法:将60只健康SD大鼠适应性饲养1w后随机分为4组,每组15只,分别为正常组、模型组、艾司唑仑组、固本健脑液组。造模组(模型组、固本健脑液组、艾司唑仑组)进行D-半乳糖200mg.kg-1.d-1颈背部皮下注射,注射时间为8w,建立衰老模型;正常组同时皮下注射等剂量生理盐水。随后将造模组放入自制睡眠剥夺箱,每天07:00开始进行睡眠剥夺18小时,连续进行21d,采用HomecageScan3.0实时监测系统检测各组模型大鼠在笼内的所有行为并进行分析,观察时间为24h。在造模结束后各组取5只实验大鼠进行电极埋置,术后第一天艾司唑仑组予以给药剂量为0.09mg.kg-1.d-1,固本健脑液组予以给药剂量为16g.kg-1.d-1灌胃;正常组与模型组灌服与艾司唑仑组等剂量的生理盐水作为实验对照,所有动物每晚18:00给药一次,连续灌胃给药2w。给药结束后第一天进行脑电肌电描记,时间为24h。H.E.染色法观察各组大鼠下丘脑形态,免疫组化和蛋白印迹检测GABAARα1、GABAARγ2、NKCC1蛋白表达。结果:HomeCage监测显示,造模组大鼠喜静少动,活动次数明显低于正常组,毛发干枯无光泽,饮水次数明显增加,睡眠持续时间显著性降低(P<0.05),睡眠觉醒次数多且昼夜节律颠倒,说明模型复制成功。Sleepsign监测肌电脑电显示,与正常组相比,模型组白天觉醒累积量明显增高(P<0.05),觉醒次数显著增多(P<0.05),REM睡眠累积量明显降低(P<0.05),夜间NREM睡眠显著降低(P<0.05);艾司唑仑组白天睡眠累积量无显著差异,睡眠持续时间显著升高(P<0.05),REM睡眠累积量明显降低(P<0.05),夜间NREM睡眠累积量明显增多(P<0.05);固本健脑液组与正常组相比,无显著差异。H.E.染色结果显示用药组的大鼠细胞分布基本正常,核萎缩较少,说明艾司唑仑、固本健脑液能改善下丘脑的细胞异变状态。免疫组化和蛋白印记的实验证实固本健脑液组GABAARα1、GABAARγ2的蛋白表达升高,NKCC1的蛋白表达降低。结论:(1)固本健脑液能有效改善老年大鼠的失眠状态。(2)固本健脑液能有效的改善下丘脑细胞异变状态,并通过上调GABAARα1、GABAARγ2、降低NKCC1,加强GABA与其受体的结合。(3)固本健脑液对老年大鼠失眠的作用机制,与调节GABA能传导系统有关。
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