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桉树是桉属(Eucalyptus L Herit.)树种的统称,桉树人工林在世界各地广泛种植,为人类社会带来了巨大的经济效益,是重要的造林、造纸树种。本研究旨在优化尾细桉YL02无性系体外再生体系,构建完整的遗传转化体系,得到稳定的转基因植株,并成功克隆巨桉(Eucalyptus grandis)BRI1基因,对其基因功能进行初步分析。为今后的桉树转基因育种和功能鉴定奠定基础,研究结果如下:1)通过对外植体种类的筛选,激素种类及浓度的筛选,选择生根培养基上生长25-30天的生根苗上、中部茎段为材料,在TDZ浓度为0.025 mg/L,IBA浓度为0.1 mg/L的改良MS培养基上,不定芽分化率最高。2)使用含有PBI121质粒的农杆菌GV3101菌种,选择长势良好的YL02生根苗,切取中、上部茎段,不经过预培养,将切好的茎段放入已重悬浮好的菌液中,泡菌30min,结束后将茎段放入改良MS培养基中,共培养基上放一张经过高压灭菌的滤纸,暗共培养48 h,后转移至筛选培养基中,每两周换一次筛选培养基(卡那霉素90 mg/L、头孢霉素150 mg/L、特美汀50 mg/L)。经筛选培养基分化出不定芽后,转移至带有抗生素的桉树增殖培养基中,待苗足够健壮转移至带有抗生素的生根培养基中,提取阳性植株的DNA进行PCR检测(使用GUS引物及NPTⅡ引物),且对转基因植株进行GUS染色,证明成功获得带有GUS基因的阳性植株。3)油菜素内酯(Brassinosteroids,BRs)是一类重要的植物激素,在植物的生长发育过程中发挥着重要的作用,因此本研究选择BR信号的受体蛋白BRI1(brassinosteroid insensitive 1)作为研究对象。成功克隆了Egr BRI1基因,全长为3893 bp,编码1197个氨基酸,对其进行生物信息学分析及亚细胞定位预测发现,该蛋白结构稳定,结构高度保守,具有多个亮氨酸重复序列,于细胞膜上发挥生理作用;对其进行不同组织表达分析发现,BRI1基因在幼嫩叶中表达量最大,在成熟叶中表达量最少,在木质部,韧皮部和根中均有表达。利用实时荧光定量PCR对其在茉莉酸甲酯(Me JA)、油菜素内酯(BR)、水杨酸处(SA)理下进行表达分析发现,Me JA处理1 h的Egr BRI1表达量是对照的593倍,BR 1 h处理后Egr BRI1表达量略微降低,在168 h处理时表达量达到最高,约为对照的2.9倍,外施水杨酸对Egr BRI1基因表达量却无明显影响,同时还分析了盐胁迫及冷胁迫下Egr BRI1基因的表达模式,发现盐处理6 h的Egr BRI1表达量有明显上调,为对照的2.3倍。而冷胁迫处理48 h的Egr BRI1表达量为对照的1.6倍。以上结果说明Egr BRI1基因在桉树响应胁迫和外源激素处理时能够特异性表达,参与到生物和非生物胁迫响应的调控机制中。这些研究结果表明Egr BRI1基因在桉树生长发育过程中起到的重要作用。