马红球菌(Rhodococcus equi)是马群聚居地常见的一种存在于土壤中的兼性细胞内寄生的革兰氏阳性球杆菌,可导致马驹亚急性或慢性化脓性支气管肺炎和广泛性肺部脓肿。马红球菌病致死率可达80%以上,可对马场乃至马业造成严重的经济损失。到目前为止,我国R.equi的报导几乎为零,缺乏标准的病原以及血清流行病学调查方法。最近报导,R.equi毒力相关脂蛋白A(VapA)是唯一的与细菌毒力相关的膜表面脂蛋白,可作为致病性R.equi的标志性抗原。因此,本研究通过构建表达VapA重组蛋白(rVapA),建立了检测致病性R.equi血清抗体的间接ELISA检测方法以及检测土壤中致病性与非致病性R.equi的菌落印记方法,并对我国马群及马聚居地R.equi进行了流行病学调查,为我国马红球菌病的防治提供技术支持、数据支撑和理论基础。首先,本研究选用pMAL-c5x原核表达体系,通过表达条件优化,融合表达了可溶性rVapA,经WB验证,其具有良好的反应原性。其次,以纯化的rVap A作为包被抗原,经条件优化,构建了致病性R.equi血清抗体间接ELISA检测方法,阳性临界值为0.370。经特异性、重复性及敏感性试验,结果表明,其与H3N8马流感、马鼻肺炎、马传染性贫血抗血清无交叉反应,且批内与批间变异系数均小于15%,具有较好的特异性、重复性和敏感性。采用该方法,首次对我国部分地区马匹进行R.equi血清流行病学调查。结果表明,致病性R.equi血清抗体总体阳性率高达53.93%,且抗体水平呈显著的地区性差异,存在品种、性别和季节特点,而与年龄无关。最后,本研究使用兔抗非致病性R.equi多抗以及兔抗致病性R.equi VapA蛋白多抗,并通过条件优化,构建了可用于R.equi检测并区分致病性与非致病性R.equi的菌落印记检测方法。与细菌分离鉴定及R.equi PCR鉴定方法相比,该检测方法具有敏感性高、特异性好、检测快速的优点。采用该方法对我国部分地区马场土壤中R.equi进行流行病学调查。结果表明,R.equi在马场土壤中的分布与马匹活动有关,所有土壤样本采集马场均可分离鉴定出R.equi,土壤中R.equi的平均阳性率为43.21%,未发现致病性R.equi。本研究获得融合表达rVapA蛋白,为R.equi致病机制研究提供材料基础,并为马红球菌病的诊疗方法的建立提供物质基础。本研究建立的间接ELISA检测方法以及菌落印记检测方法为马红球菌病流行病学调查提供技术支撑。本研究获得的全国马匹R.equi血清学及马场R.equi流行病学信息,填补了我国R.equi流行情况空白的现状,为我国R.equi的防控提供基础数据。