祁州漏芦乙醇提取物对Chang Liver细胞损伤的保护作用

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目的:探索祁州漏芦乙醇提取物(RUEE)对过氧化氢(H202)致肝细胞损伤的保护作用。方法:1.确定RUEE对Chang Liver细胞的安全浓度范围:利用MTT法测定Chang Liver细胞在不用药物浓度下的细胞存活率,确定实验所用药物浓度范围。2.建立RUEE抗H2O2诱导Chang Liver细胞氧化应激模型:将培养良好的Chang Liver细胞分为正常对照组、模型组、RUEE高、中、低剂量组,正常对照组和模型组用无血清培养液培养24h,各药物组用含RUEE(100、50、25mg/L)无血清培养液培养24h,模型组和药物组用300μmol/L H2O2诱导损伤2h来建立氧化应激损伤模型。3.RUEE对H2O2诱导Chang Liver细胞的保护作用研究:①利用MTT法测定氧化应激模型的细胞存活率;②比色法测定各组细胞培养液中LDH、 ALT和AST的活性;③比色法测定各组细胞内MDA含量和GSH活性;④利用Western blot法检测各组细胞中的Nrf2蛋白的含量。结果:1.RUEE的安全浓度范围:RUEE在12.5~100mg/L范围内,对Chang Liver细胞存活率无显著影响,不具细胞毒作用。因此,本研究分别选100、50、25mg/L为RUEE高、中、低剂量。2.RUEE对H2O2诱导损伤Chang Liver细胞的保护作用:①细胞存活率结果显示,与正常对照组比较,模型组的细胞存活率为(54.1±4.8)%,显著降低(P<0.05);经RUEE干预后,高、中、低剂量RUEE组的细胞存活率分别增高到(84.6±12.1)%、(82.5±5.6)%和(73.4±3.3)%(P<0.05);②与正常对照组比较,模型组培养液LDH、ALT、AST活性显著升高(P<0.05);与模型组比较,RUEE高、中、低剂量组培养液中LDH和ALT、AST活性显著降低(P<0.05);③与正常对照组比较,模型组细胞MDA含量显著升高(P<0.05),GSH含量显著降低(P<0.05);与模型组比较,RUEE各剂量组MDA含量均显著降低(P<0.05),RUEE高、中剂量组GSH含量显著升高(P<0.05);④与正常对照组比较,模型组细胞核中Nrf2蛋白含量增高(P<0.05);经RUEE处理后,细胞核中Nrf2蛋白含量进一步增高(P<0.05)。结论:1RUEE对H2O2诱导Chang Liver细胞损伤具有明显的保护作用;2.其作用机制可能与其增高抗氧化能力,增高细胞核中Nrf2蛋白含量有关。
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