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目的:比较国内三种主流方法:液相色谱-质谱法(LC-MS/MS)、电化学发光法(ECLIA)以及酶联免疫法(ELISA),同时测定同批血清25-羟维生素D(25(OH)D)的差异性、一致性。方法:于2015-07-01至2015-07-07,到河北医科大学第二医院儿科内分泌门诊行健康体检的儿童,共64份高低不同维生素D状况的血清。每份血清同时应用LC-MS/MS测定25(OH)D2、25(OH)D3浓度、ECLIA测定总25(OH)D浓度及ELISA(IDS)测定总25(OH)D浓度,进而应用SPSS17.0软件对每两种方法测定结果进行比较、直线相关关系分析、Bland-Altman法一致性检验。结果:1 LC-MS/MS测定64例血清25(OH)D数据符合正态分布,均数为65.37nmol/L,标准差为15.73nmol/L;ELISA和ECLIA测定结果均为非正态分布,中位数分别为:61.92nmol/L、60.18 nmol/L。Wilcoxon检验示每两种方法之间均数(中位数)差异均无统计学意义。箱式图示三种方法测定结果的平均水平均接近;ELISA与LC-MS/MS测定结果整体分布较一致,而ECLIA与其他两种方法相比,整体数据分布存在较大差异;2若将25(OH)D浓度50nmol/L、50-72.5nmol/L分别定义为维生素D缺乏、不足的切值,64例儿童中维生素D缺乏症的比例分别是:15.63%(ELISA)、17.18%(LC-MS/MS)、31.25%(ECLIA);维生素D不足的比例分别是:57.82%(ELISA)、54.69%(LC-MS/MS)、39.06%(ECLIA)。ELISA和LC-MS/MS结果一致,ECLIA与前两者差异较大;3每两种方法之间线性回归方程及相关系数为:Y(ECLIA)=1.32X(LC-MS/MS)-22.2(r=0.93);Y(ECLIA)=1.05X(ELISA)-4.73(r=0.81;Y(ELISA)=0.91X(LC-MS/MS)+5.79(r=0.84)。三种方法间均具有高度正相关性;4 ECLIA与LC-MS/MS的Bland-Altman图:4/64的点位于95%一致性界限外,在一致性界限内两方法相比,差值绝对值最大为17.05nmol/L,比值最大、最小分别为1.3、0.65;ELISA与LC-MS/MS:4/64的点位于95%一致性界限外,一致性界限内差值绝对值最大18.17nmol/L,比值最大、最小分别为1.3、0.75;ECLIA与ELISA:3/64的点位于95%一致性界限外,界限内差值绝对值最大为29.42nom/L,比值最大、最小分别为1.5、0.6。结论:当血清总25(OH)D浓度在一定范围内,且25(OH)D2含量极低时,ECLIA、LC-MS/MS、ELISA测定血清25(OH)D具有高度正向相关性,结合箱式图、直线回归方程、一致性检验分析,ECLIA所测血清25(OH)D水平与LC-MS/MS、ELISA具有一定差异性,而LC-MS/MS、ELISA差异性小、一致性佳。