目的:龋病是一种主要威胁口腔牙齿健康的常见病,是在以细菌为主的多因素作用下牙硬组织脱矿,有机物分解的一种进行性破坏性疾病。对于龋病及相关致龋机制的研究,已成为口腔科学的研究热点。儿童是龋病的好发人群。变异链球菌现已明确为主要的致龋菌,但是儿童口腔感染的变异链球菌在致龋能力上有何差异?细菌有何变异?对于儿童牙齿健康有多大威胁?儿童的饮食起居习惯对于龋病的发生有何直接关系?儿童致龋菌的基因突变与儿童龋病发生有何关系?这些研究目前报道较少。儿童的口腔健康决定一个国家长期口腔健康的发展战略。因此,对于儿童龋病的相关研究也是口腔医学的研究重点。口腔细菌致龋是通过形成牙菌斑,附着在牙面上产酸,实现对牙体组织的破坏。因此,牙菌斑的获取是研究致龋菌的细菌来源。目前龋病的研究,多数集中在细菌的染色性、菌落形态、生化特性、代谢产物以及对菌斑生物膜影响的分析上。罕见在分子水平上分析基因突变率。本实验重点研究儿童龋病发生中,主要致龋菌在分子水平和基因位点上的突变,确定致龋菌的突变率及细菌的致龋能力。探讨儿童龋病发生与致龋菌基因突变的关系。本研究对于2015年7月~2016年2月期间,在河北医科大学口腔医院接受窝沟封闭治疗的石家庄市(外国语学校、师大附小、十里铺小学、方北小学)8~12岁学龄儿童,进行龋病的问卷调查,分析学龄儿童睡前零食与刷牙情况对龋病发生的影响。设计变异链球菌的特异性引物,提取学龄儿童的口腔牙菌斑进行PCR扩增,对PCR阳性的变异链球菌进行核酸序列分析,确定变异链球菌的基因类型,研究细菌的基因突变与致龋力的关系。方法:1按照WHO口腔健康标准,选取2015年7月~2016年2月期间,在河北医科大学口腔医院接受窝沟封闭治疗的石家庄市(外国语学校、师大附小、十里铺小学、方北小学)8岁~12岁学龄儿童。调查对象共60名儿童,龋病组30例,无龋组30例。2设计调查问卷,对60名学龄儿童进行问卷调查,收集龋病发病的临床资料,分析学龄儿童睡前零食及刷牙情况与龋病发生的关系。3收集60名学龄儿童颊舌侧釉质表面的牙菌斑。4设计变异链球菌的特异性引物,采用PCR扩增技术,确定PCR扩增阳性病例,确定变异链球菌是学龄儿童的主要致龋菌。5通过对PCR扩增的阳性病例进行核酸测序分析,确定主要致龋菌的基因类型及突变率。确定龋病组与无龋组主要致龋菌突变率之间存在差异。6根据核酸测序结果构建变异链球菌的系统发育树,确定不同基因型变异链球菌之间的进化距离。7统计学分析采用秩和检验,对基因突变率进行统计学分析。利用卡方检验,对变异链球菌阳性病例检出率,进行统计学分析。结果:1在对60名学龄儿童的问卷调查中发现,学龄儿童普遍存在睡前饮料和睡前甜点的现象。龋病组与无龋组学龄儿童在睡前饮料和睡前甜点对龋病的发生上,差别无显著性(P<0.05)。2在对60名学龄儿童刷牙情况的调查显示,学龄儿童均已养成刷牙习惯。但龋病组儿童晚刷牙者多于无龋组儿童,差别无显著性(P<0.05)。3经变异链球菌PCR证实60例学龄儿童样本中,31例学龄儿童感染了变异链球菌。其中龋病组21例,无龋组10例,龋病组与无龋组变异链球菌检出率有显著性差异(P<0.05)。4变异链球菌核酸测序结果显示,龋病组变异链球菌突变率达12.7%~31.3%,平均21.314%。无龋组变异链球菌突变率达32.3%~39.2%,平均36.14%。经统计学分析,龋病组与无龋组变异链球菌突变率之间的差异有显著性(P<0.05),无龋组变异链球菌的突变率高于龋病组,差异有显著性(P<0.05)。5构建龋病组与无龋组的变异链球菌的系统发育树,证实龋病组变异链球菌与标准菌株的进化距离更为接近;而无龋组变异链球菌突变率大,与标准菌株进化距离远。结论:1变异链球菌是学龄儿童龋病发生的主要致龋菌。2学龄儿童口腔感染的变异链球菌存在基因突变,龋病组突变率为12.7%~31.3%,无龋组突变率为32.3%~39.2%。无龋组的突变率明显高于龋病组(P<0.05)。3变异链球菌突变率达到或超过36.14%水平时,细菌的致龋能力明显降低(P<0.05)。