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急性冠脉综合征（acutecoronarysyndrome,ACS）属于冠心病的一种严重类型。大部分ACS病是因冠状动脉粥样硬化斑块不稳定的结果[1]。在治疗ACS病时，临床上常联合使用替格瑞洛与丹参酮IIA磺酸钠。替格瑞洛主要经肝药酶CYP3A4代谢，部分由CYP3A5代谢。而丹参酮IIA磺酸钠可抑制肝药酶CYP3A4代谢，理论上可导致替格瑞洛代谢减慢，使其在体内的滞留时间延长。目前临床医生在联合用药时，还多是按照药品说明书上提供的单药使用时的推荐剂量应用，让人对此可能带来的不良后果不免有些担忧。本研究拟通过建立稳定、有效、可靠的高效液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）测定血药浓度，在大鼠体内观察替格瑞洛和丹参酮IIA磺酸钠联合使用时，对药代动力学的相互影响，为临床安全合理用药提供参考。
方法：
1.血药浓度检测方法的建立：采用高效液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）检测大鼠血浆中替格瑞洛和丹参酮IIA磺酸钠的血药浓度。
血浆样品处理：大鼠空白血浆样品加入药品标准品和内标，乙腈沉淀蛋白，离心，过滤器除去杂质，进样。
色谱条件：C18色谱柱；测定替格瑞洛的流动相：乙腈-10mmol/L醋酸铵水溶液（用甲酸调pH到3.14）（80:20，V/V）；流速：0.4ml/min；进样量为5μL；柱温：40℃；内标：布洛芬。测定丹参酮IIA磺酸钠的流动相：乙腈-0.4mmol/L甲酸铵水溶液（加甲酸16ppm）（40:60，V/V）；流速：0.3mL/min；进样量为5μL，柱温：40℃；内标：氘5-脱去氢表雄酮硫酸钠盐（DHEAS-D5）。
质谱条件：TripleQuad6500三重四级杆液相质谱联用仪，多重反应检测模式。质谱检测的替格瑞洛、丹参酮IIA磺酸钠、内标布洛芬、内标DHEAS-D5离子对(m/z)分别为521→361、372.1→97.8、205→161、373.1→357.1。
2.单次给药：SD大鼠随机分成3组，编号A、B、C组，每组6只。A组给予替格瑞洛混悬液16.2mg/kg灌胃，B组尾静脉注射丹参酮IIA磺酸钠注射液5.4mg/kg，C组为联合给药组，两药物给药方式和剂量与前2组相同。大鼠颈静脉插管按设定的时间点取血，血样处理，定量测定血药浓度。
3.长期给药：分组同上，A组替格瑞洛混悬液灌胃，采用负荷剂量16.2mg/kg，和维持剂量8.1mg/kg给药，早晚各一次，第7天晨给药后取血；B组每日清晨尾静脉注射丹参酮IIA磺酸钠注射液5.4mg/kg，连续7天后取血。血样处理后定量测定血药浓度。
4.数据处理：运用winnonlin6.1软件计算拟合得到药代动力学参数，采用t检验对数据进行统计学分析。
结果：
1.两药物在5~1000ng/mL范围内的峰面积和质量浓度呈良好的线性关系。方法学考察均符合要求。
2.单次给药：
（1）替格瑞洛：AUC(0-t)、AUC(0-∞)、t1/2、Tmax、Cmax、V、CL单独用药时分别为1134.00±219.08h*ng/mL、1358.67±229.62h*ng/mL、8.82±1.37h、3.33±1.03h、122.57±32.05ng/mL、156.18±39.65L/kg、12.20±2.00L/h/kg；联合用药后分别为1596.10±359.30h*ng/mL、1898.89±545.22h*ng/mL，9.33±1.76h、3.66±0.82h、201.17±43.77ng/mL、120.75±35.30L/kg、9.09±2.36L/h/kg。药时曲线下面积AUC(0-t)、AUC(0-∞)和血药峰浓度Cmax升高（P<0.05）。
（2）丹参酮IIA磺酸钠：AUC(0-t)、AUC(0-∞)、t1/2、Cmax、V、CL单独用药时分别为278.26±81.93h*ng/mL、288.41±87.82h*ng/mL、2.21±0.94h、194.67±28.60ng/mL、60.71±22.13L/kg、20.19±5.61L/h/kg；联合用药后分别为144.31±37.78h*ng/mL、149.25±37.76h*ng/mL、2.57±0.6h、101.08±32.56ng/mL、133.91±36.64L/kg、37.01±9.38L/h/kg。药时曲线下面积AUC(0-t)，AUC(0-∞)和血药峰浓度Cmax降低，而表观分布容积V和清除率CL提高（P<0.05）。
3．长期给药
（1）替格瑞洛：AUC(0-t)、AUC(0-∞)、t1/2、Tmax、Cmax、V、CL单独用药时为919.71±340.07h*ng/mL、1060.09±381.66h*ng/mL、8.93±1.98h、3.67±0.82h、113.13±34.44ng/mL、111.62±50.17L/kg、8.62±3.34L/h/kg；联合用药后分别为1344.35±168.10h*ng/mL、1571.83±191.30h*ng/mL、8.37±0.94h、4.33±0.82h、158.68±36.93ng/mL、63.23±12.50L/kg、5.22±0.64L/h/kg。曲线下面积AUC(0-t)、AUC(0-∞)升高，表观分布容积V和清除率CL降低（P<0.05）
（2）丹参酮IIA磺酸钠：AUC(0-t)、AUC(0-∞)、t1/2、Cmax、V、CL单独用药时为304.92±93.37h*ng/mL、306.71±93.98h*ng/mL、2.60±1.10h、285.17±57.85ng/mL、71.75±42.05L/kg、19.03±5.78L/h/kg；联合用药后分别为162.87±53.92h*ng/mL、165.60±54.19h*ng/mL、2.50±0.68h、157.88±62.57ng/mL、133.15±64.15L/kg、37.81±20.17L/h/kg。药时曲线下面积AUC(0-t)，AUC(0-∞)和血药峰浓度Cmax下降（P<0.05）。
结论：替格瑞洛和丹参酮IIA磺酸钠联合用药后，单次给药或长期给药都可使替格瑞洛在大鼠体内代谢减慢，但不排除丹参酮IIA磺酸钠同时可促进替格瑞洛在大鼠体内的吸收；使丹参酮IIA磺酸钠在体内的消除加快，且药物有更多进入组织中。提示在联合用药时，可考虑适当减少替格瑞洛的使用剂量，加大丹参酮IIA磺酸钠的使用剂量。
方法：
1.血药浓度检测方法的建立：采用高效液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）检测大鼠血浆中替格瑞洛和丹参酮IIA磺酸钠的血药浓度。
血浆样品处理：大鼠空白血浆样品加入药品标准品和内标，乙腈沉淀蛋白，离心，过滤器除去杂质，进样。
色谱条件：C18色谱柱；测定替格瑞洛的流动相：乙腈-10mmol/L醋酸铵水溶液（用甲酸调pH到3.14）（80:20，V/V）；流速：0.4ml/min；进样量为5μL；柱温：40℃；内标：布洛芬。测定丹参酮IIA磺酸钠的流动相：乙腈-0.4mmol/L甲酸铵水溶液（加甲酸16ppm）（40:60，V/V）；流速：0.3mL/min；进样量为5μL，柱温：40℃；内标：氘5-脱去氢表雄酮硫酸钠盐（DHEAS-D5）。
质谱条件：TripleQuad6500三重四级杆液相质谱联用仪，多重反应检测模式。质谱检测的替格瑞洛、丹参酮IIA磺酸钠、内标布洛芬、内标DHEAS-D5离子对(m/z)分别为521→361、372.1→97.8、205→161、373.1→357.1。
2.单次给药：SD大鼠随机分成3组，编号A、B、C组，每组6只。A组给予替格瑞洛混悬液16.2mg/kg灌胃，B组尾静脉注射丹参酮IIA磺酸钠注射液5.4mg/kg，C组为联合给药组，两药物给药方式和剂量与前2组相同。大鼠颈静脉插管按设定的时间点取血，血样处理，定量测定血药浓度。
3.长期给药：分组同上，A组替格瑞洛混悬液灌胃，采用负荷剂量16.2mg/kg，和维持剂量8.1mg/kg给药，早晚各一次，第7天晨给药后取血；B组每日清晨尾静脉注射丹参酮IIA磺酸钠注射液5.4mg/kg，连续7天后取血。血样处理后定量测定血药浓度。
4.数据处理：运用winnonlin6.1软件计算拟合得到药代动力学参数，采用t检验对数据进行统计学分析。
结果：
1.两药物在5~1000ng/mL范围内的峰面积和质量浓度呈良好的线性关系。方法学考察均符合要求。
2.单次给药：
（1）替格瑞洛：AUC(0-t)、AUC(0-∞)、t1/2、Tmax、Cmax、V、CL单独用药时分别为1134.00±219.08h*ng/mL、1358.67±229.62h*ng/mL、8.82±1.37h、3.33±1.03h、122.57±32.05ng/mL、156.18±39.65L/kg、12.20±2.00L/h/kg；联合用药后分别为1596.10±359.30h*ng/mL、1898.89±545.22h*ng/mL，9.33±1.76h、3.66±0.82h、201.17±43.77ng/mL、120.75±35.30L/kg、9.09±2.36L/h/kg。药时曲线下面积AUC(0-t)、AUC(0-∞)和血药峰浓度Cmax升高（P<0.05）。
（2）丹参酮IIA磺酸钠：AUC(0-t)、AUC(0-∞)、t1/2、Cmax、V、CL单独用药时分别为278.26±81.93h*ng/mL、288.41±87.82h*ng/mL、2.21±0.94h、194.67±28.60ng/mL、60.71±22.13L/kg、20.19±5.61L/h/kg；联合用药后分别为144.31±37.78h*ng/mL、149.25±37.76h*ng/mL、2.57±0.6h、101.08±32.56ng/mL、133.91±36.64L/kg、37.01±9.38L/h/kg。药时曲线下面积AUC(0-t)，AUC(0-∞)和血药峰浓度Cmax降低，而表观分布容积V和清除率CL提高（P<0.05）。
3．长期给药
（1）替格瑞洛：AUC(0-t)、AUC(0-∞)、t1/2、Tmax、Cmax、V、CL单独用药时为919.71±340.07h*ng/mL、1060.09±381.66h*ng/mL、8.93±1.98h、3.67±0.82h、113.13±34.44ng/mL、111.62±50.17L/kg、8.62±3.34L/h/kg；联合用药后分别为1344.35±168.10h*ng/mL、1571.83±191.30h*ng/mL、8.37±0.94h、4.33±0.82h、158.68±36.93ng/mL、63.23±12.50L/kg、5.22±0.64L/h/kg。曲线下面积AUC(0-t)、AUC(0-∞)升高，表观分布容积V和清除率CL降低（P<0.05）
（2）丹参酮IIA磺酸钠：AUC(0-t)、AUC(0-∞)、t1/2、Cmax、V、CL单独用药时为304.92±93.37h*ng/mL、306.71±93.98h*ng/mL、2.60±1.10h、285.17±57.85ng/mL、71.75±42.05L/kg、19.03±5.78L/h/kg；联合用药后分别为162.87±53.92h*ng/mL、165.60±54.19h*ng/mL、2.50±0.68h、157.88±62.57ng/mL、133.15±64.15L/kg、37.81±20.17L/h/kg。药时曲线下面积AUC(0-t)，AUC(0-∞)和血药峰浓度Cmax下降（P<0.05）。
结论：替格瑞洛和丹参酮IIA磺酸钠联合用药后，单次给药或长期给药都可使替格瑞洛在大鼠体内代谢减慢，但不排除丹参酮IIA磺酸钠同时可促进替格瑞洛在大鼠体内的吸收；使丹参酮IIA磺酸钠在体内的消除加快，且药物有更多进入组织中。提示在联合用药时，可考虑适当减少替格瑞洛的使用剂量，加大丹参酮IIA磺酸钠的使用剂量。