【摘 要】
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肿瘤的生长和转移与血管生成密切相关,因此通过抑制血管生长来治疗肿瘤已经成为一种非常有前景的手段.Angiostatin是0Relly M S等在1994年发现的内源性的血管抑制因子,能在体
【出 处】
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中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院
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肿瘤的生长和转移与血管生成密切相关,因此通过抑制血管生长来治疗肿瘤已经成为一种非常有前景的手段.Angiostatin是0Relly M S等在1994年发现的内源性的血管抑制因子,能在体外特异性地抑制血管内皮细胞的增殖和迁移,并能抑制多种肿瘤的生长和转移.序列分析表明,Angiostatin是纤溶酶原水解后的产物,由人纤溶酶原氨基端的4个圆饼状结构(Kringle)组成.Kringle结构由约80个氨基酸组成,通过内部的3对二硫键固定成稳定的圆饼状结构.后续的研究结果表明,许多Kringle结构都具有抑制内皮细胞生长和迁移的活性.我们通过RT-PCR从HepG2细胞获得了编码人纤溶酶原(hPlasminogen)的第一到第四个Kringle结构域以及部分第五个Kringle结构域(以下简称K1-4.5)和人纤溶酶原的第一到第五个Kringle结构域(以下简称K1-5)的cDNA,将其克隆到毕赤酵母表达载体,然后分别转化毕赤酵母GS115得到整合K1-4.5及K1-5基因的转化子.发酵液利用赖氨酸亲和柱纯化,得到重组蛋白质K1-4.5和K1-5.发现rhK1-4.5和rhK1-5均能特异性地按剂量依赖的方式抑制碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)刺激的牛主动脉内皮细胞(BAEC)的增殖,达到最大抑制效果一半时所需要的浓度(ED<,50>)分别为2μg/ml(K1-4.5)和14μg/ml(K1-5).rhK1-4.5和rhK1-5还能抑制bFGF引起的BAEC的迁移,并能使细胞在G<,0>-G<,1>期积聚.
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