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已有研究表明,正常小鼠模型中,褪黑素能有效减轻高剂量表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)导致的肝毒性。这提示我们褪黑素和EGCG是一对好拍档。大量研究表明高剂量的EGCG和褪黑素在抗癌方面有着明确的作用。但是高剂量意味着高风险。EGCG和褪黑素联用能否取得更好的抑癌效果从而降低各自的用量值得探究。而至今没有关于EGCG和褪黑素联用抑癌的研究。本研究通过MTT实验、免疫印迹实验、醌化蛋白测定、RT-PCR和Q-PCR等方法探究了EGCG和褪黑素联合使用后的抗癌效果及其背后分子机制。褪黑素(N-乙酰-5-甲氧色胺)是一种主要由松果腺体分泌的吲哚胺复合物。它是一种有着许多生理功能的激素。它能够调节生物节律、调节免疫应答,抗氧化以及抗癌。通过蛋白免疫印迹和MTT实验,我们发现在TCA细胞中,褪黑素能够剂量依赖的上调细胞核内Trx1、TrxR1、p21蛋白含量以及细胞毒性。这说明,褪黑素处理TCA细胞产生的p21上调是产生细胞毒性的重要原因。而p21上调是由于褪黑素处理TCA细胞后使内Trx1和TrxR1增多引起的p53转录激活导致的。在HepG2细胞中,我们发现褪黑素反过来压制p21。而p21被压制可以敏化众多抗癌药物的细胞毒性。因此我们可以得出一个结论,p21的响应是反映褪黑素细胞毒性的一个重要指标。表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)提取于绿茶,表现出各种各样的生物活性例如抗癌,抗病毒和保护神经系统等。通过MTT实验,我们发现在TCA细胞中EGCG可以剂量依赖的产生细胞毒性。通过测量EGCG处理细胞后的醌化蛋白水平发现,EGCG可以剂量依赖的促进TCA细胞产生醌化蛋白,并且在EGCG处理6h时醌化蛋白水平基本达到平台期。而在加入2mM NAC与50U/ml CAT的抗氧化剂组合后,EGCG的细胞毒性与醌化蛋白水平均被抑制。由此可得出结论,醌化蛋白水平与EGCG所产生的细胞毒性呈正相关。我们通过在TCA和HepG2细胞上比较EGCG褪黑素合并处理组与EGCG或褪黑素单独处理组去研究EGCG和褪黑素能否协同抑癌。在TCA细胞上,EGCG褪黑素合并处理组中,褪黑素不会影响EGCG引起的醌化蛋白的大量增加,EGCG也不会干扰褪黑素诱导的p21上升。因此在细胞生存、划痕和集落形成实验上合并处理组产生了更强的细胞毒性。在HepG2细胞上,合并处理组中,褪黑素同样不会削弱EGCG在醌化蛋白上的作用,并正如细胞生存、划痕和集落形成实验反映出来的那样,很大程度上增加了EGCG的细胞毒作用。总之,本研究表明在TCA细胞上和HepG2细胞上EGCG和褪黑素能够产生协同抑癌作用并阐述了其分子机制。