【摘 要】
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目的:观察GINS2-sh RNA(sh GINS2)对恶性黑素瘤A375细胞的作用效果,探讨GIN S2作用于恶性黑素瘤细胞的机制,初步明确mi R-23a-3p通过靶向调控GINS2的表达从而抑制恶性黑素瘤的发展,为恶性黑素瘤的基因靶向治疗提供理论依据。方法:1、使用已制备成功的分为sh GINS2组及sh NC组的A375细胞,采用Celigo细胞计数检测各组细胞增殖情况;流式细胞术检测各组
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目的:观察GINS2-sh RNA(sh GINS2)对恶性黑素瘤A375细胞的作用效果,探讨GIN S2作用于恶性黑素瘤细胞的机制,初步明确mi R-23a-3p通过靶向调控GINS2的表达从而抑制恶性黑素瘤的发展,为恶性黑素瘤的基因靶向治疗提供理论依据。方法:1、使用已制备成功的分为sh GINS2组及sh NC组的A375细胞,采用Celigo细胞计数检测各组细胞增殖情况;流式细胞术检测各组细胞周期;MTT法测定各组细胞活力;检测各组caspase 3/7活性。2、采用生物信息预测软件对mi R-23a-3p与GINS2的结合位点进行分析;用mi R-23a-3p模拟物或NC模拟物与GINS2的野生型或突变型共转染A375细胞,双荧光素酶报告基因检测各转染组相对荧光素酶活性;q RT-PCR及Western blot检测NC组、mi R-23a-3p模拟组及mi R-23a-3p抑制组中GINS2基因m RNA及蛋白的表达情况。3、对各组结果进行统计学分析。结果:1、Celigo细胞计数示:sh GINS2组较sh NC组细胞增殖抑制明显(P<0.01);流式细胞术检测示:sh GINS2组较sh NC组细胞处于G1期的细胞增多(P<0.01),处于S期的细胞减少(P<0.01),处于G2/M期的细胞增多(P<0.05),细胞周期阻滞;MTT法检测示:sh GINS2组较sh NC组细胞活力降低,细胞增殖减缓(P<0.001);caspase 3/7活性检测示:sh GINS2组较sh NC组caspase 3/7活性增加,凋亡明显增多(P<0.001)。2、生物信息预测软件结果示:GINS2野生型包含有mi R-23a-3p的互补结合序列;双荧光素酶报告基因检测示:mi R-23a-3p模拟+GINS2野生型组较NC模拟+GINS2野生型组组荧光明显减少(P<0.01);其余组比较荧光无明显变化;q RT-PCR及Western blot检测示:mi R-23a-3p模拟组较NC组GINS2基因m RNA及蛋白的表达减少(P<0.05)。mi R-23a-3p抑制组较NC组GINS2基因m RNA及蛋白的表达量增多(P<0.01),GINS2与mi R-23a-3p的表达呈负相关。结论:1、GINS2是恶性黑素瘤细胞增殖关键调节因子,GINS2-sh RNA可抑制恶性黑素瘤细胞增殖、促进恶性黑素瘤细胞凋亡;2、在恶性黑素瘤细胞中,GINS2基因受mi R-23a-3p调控,二者呈负相关。mi R-23a-3p上调时,GINS2的m RNA下调,蛋白表达下调,促凋亡因子Caspase3/7上调,进而抑制恶性黑素瘤细胞的增殖;3、本实验初步验证了GINS2在恶性黑素瘤细胞中的作用及其与mi R-23a-3p的关系,为二者可能成为恶性黑素瘤的生物标志物及分子治疗靶点奠定基础,为临床治疗提供理论依据。
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