目的根据内生真菌能够产生与宿主相同或相似的活性成分这一原理,拟从华重楼块茎组织中分离出内生真菌并进行菌种鉴定,从中筛选出有价值的抗肿瘤活性菌株,并对该菌株发酵产物的抗肿瘤活性物质基础及抗肿瘤机理进行初步研究,为进一步开发利用华重楼内生真菌资源提供实验和理论依据。方法(1)采用平板划线分离法从华重楼块茎组织中分离纯化内生真菌,采用核酸测序法对分离出的内生真菌菌株进行菌种鉴定,利用BLAST软件进行序列相似性分析,用MGEA4.0软件,以自展开法进行检测,循环1000次,UPGMA法进行聚类,分析各菌株间亲缘关系。(2)采用MTT法检测各菌株发酵液对HepG-2细胞的抑制作用,计算其细胞生长抑制率,从而筛选出抗肿瘤活性菌株；并通过优选确定一株具有高效抗肿瘤活性的菌株进行下一步的研究。(3)采用萃取、薄层层析、硅胶柱层析、凝胶柱层析和高效液相色谱法等天然药物化学的提取分离方法和波谱解析技术,分离并鉴定该菌株发酵产物中的抗肿瘤活性成分。(4)采用体外抗肿瘤实验、体外对内皮细胞生长抑制实验、细胞划痕实验、Boyden小室侵袭实验、流式细胞仪检测实验和显微镜观察细胞凋亡实验等技术,对分离出来的活性部位或化合物进行抗肿瘤活性测试和抗肿瘤作用机理研究。结果(1)从华重楼块茎中分离出24株内生真菌,经核酸测序法鉴定,分属于3个类群,8个属,分别为：镰孢菌属、支链孢属、曲霉属、裂褶菌属、多孔菌属、放射毛霉属、木霉属和刺盘孢属。其中镰孢菌属菌株数最多,占总菌数的41.7%,其次为支链孢属,占总菌数的16.7%,镰孢菌属明显为优势菌群。(2)经检测有3株内生真菌具有不同程度的抗肿瘤活性,从中优选得一株具有明显的抗肿瘤活性菌株,命名为RPF8；MTT法测得该菌株发酵液30μL处理HepG-2细胞48h,抑制率达82.45±0.46%,初步认为RPF8是一株具有高效抗肿瘤作用的华重楼内生真菌。RPF8菌株与烟曲霉基因序列具有96%同源性,但形态学上差异较大,因此暂时认为该菌株为未知菌株。(3)经抗肿瘤活性跟踪发现发酵产物的乙酸乙酯层和氯仿层具有活性,故合并为活性部位；利用传统天然药物化学的提取分离方法成功从该活性部位中分离出一个活性亚部位和两个化合物单体M1和M2,经紫外、核磁、质谱等波谱解析技术鉴定M1为麦角甾醇,M2为过氧麦角甾醇。(4)体外抗肿瘤活性检测和体外对内皮细胞生长抑制分析,发现活性部位和活性亚部位在体外均具有显著的抗人肝癌细胞株HepG-2活性,且对人脐静脉内皮细胞HUVEC有显著的生长抑制作用,而麦角甾醇及过氧麦角甾醇未表现出相关活性；流式细胞仪检测及显微观察显示活性部位和活性亚部位有明显的诱导肿瘤细胞凋亡作用。细胞划痕试验和Boyden小室侵袭试验结果表明麦角甾醇和过氧麦角甾醇具有显著的抑制人脐静脉内皮细胞HUVEC迁移作用,据此推测,该菌株活性成分可以通过抗血管生成及对肿瘤细胞的直接杀伤等作用起到抗癌活性,但其体内确切药效有待进一步研究确证。结论华重楼块茎中寄生有多种内生真菌,表现出丰富的微生物多样性,且含有抗肿瘤活性菌株。从高效抗肿瘤活性的菌株RPF8发酵产物中分离出具有诱导肿瘤细胞凋亡的活性部位和具有抗肿瘤血管生成作用的化合物单体,为华重楼内生真菌的进一步研究提供了借鉴。