论文部分内容阅读
第一章卵巢恶性肿瘤淋巴结定向高转移及其肿瘤微环境的研究进展(文献综述)卵巢上皮癌是妇科恶性肿瘤中发病率占第三位,死亡率却位居第一位的恶性疾病。由于卵巢深居于盆腔深处,位置很隐蔽,卵巢癌在发病早期缺乏特异性症状及体征,很难在早期发现和诊断,约60%-70%的卵巢癌患者确诊时已属晚期。为探索卵巢肿瘤微环境对卵巢癌淋巴结定向转移的影响,本研究以卵巢癌淋巴结高转移细胞(SKOV3-PM4)、人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)、人淋巴管内皮细胞(HLEC)为研究对象,通过构建共培养模型,观察其对细胞的生物学特性的影响。现综合近年来的文献,对人卵巢恶性肿瘤淋巴结定向高转移及其肿瘤微环境的研究现状作一简要综述。第二章卵巢癌淋巴结定向转移细胞和血管内皮细胞共培养后细胞的生物学特性研究目的：在体外卵巢癌淋巴结高转移细胞(SKOV3-PM4)-人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical venous endothelial cells, HUVEC)交互培养、共培养体系中研究交互培养、共培养后细胞的生物学特性。方法：建立荧光标记的SKOV3-PM4、HUVEC细胞,分别收集SKOV3-PM4细胞和HUVEC细胞培养基上清,作为交互培养的条件培养基,建立两种细胞交互培养与共培养的体系,MTT法测定生长曲线测定,HE染色、电镜观察细胞超微结构的改变,激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、Transwell穿膜运动实验、划痕实验、明胶酶谱分析等方法研究交互培养、共培养后各组细胞的生物学特性。结果：与单独培养的SKOV3-PM4细胞相比,采用HUVEC细胞条件培养基交互培养后的SKOV3-PM4细胞伪足增多、核分裂像增多,生长速度明显快于SKOV3-PM细胞,G1期的细胞比例降低,G2、S期的细胞比例升高,细胞的运动侵袭能力增强；与单独培养的HUVEC相比,采用SKOV-PM4细胞条件培养基交互培养后HUVEC形态改变明显,出现空泡化超微结构,生长速度与HUVE细胞相似,G1期的细胞比例升高,G2、S期的细胞比例降低,细胞的运动侵袭能力增强。共培养的绿色荧光标记的SKOV3-PM4细胞-红色荧光标记的HUVEC细胞在激光共聚焦显微镜下可见两种细胞的融合现象；明胶酶谱分析显示,基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)在单独的SKOV3-PM4细胞中低表达,在HUVEC中不表达,在共培养的SKOV3-PM4-HUVEC中高表达。结论：交互培养、共培养后SKOV3-PM4、HUVEC细胞与单独培养的SKOV3-PM4、 HUVEC相比细胞的形态发生改变,细胞增殖、侵袭、迁移运动能力均增强,推测这些生物学行为的改变与细胞生长的微环境及细胞间相互作用途径有关。第三章卵巢癌淋巴结定向转移细胞和淋巴内皮细胞共培养后细胞的生物学特性研究目的：在体外卵巢癌淋巴结高转移细胞(SKOV3-PM4)-人淋巴管内皮细胞(human lymphatic endothelial cells, HLEC)共培养体系中研究交互培养、共培养后细胞的生物学特性。方法：建立绿色荧光蛋白慢病毒载体标记的SKOV3-PM4、红色荧光标记的HLEC细胞,分别收集SKOV3-PM4细胞和HLEC细胞培养基上清,作为交互培养的条件培养基,建立两种细胞交互培养与共培养的体系,MTT法测定生长曲线测定,HE染色、电镜观察细胞超微结构的改变,激光共聚焦显微镜、Trans-well穿膜运动试验、划痕实验、小管形成实验、明胶酶谱分析等方法研究交互培养、共培养后各组细胞的生物学特性。结果：与单独培养的SKOV3-PM4细胞相比,采用HLEC细胞条件培养基交互培养后的SKOV3-PM4细胞伪足增多、核分裂像增多,生长速度明显快于SKOV3-PM细胞,细胞的运动侵袭能力增强；与单独培养的HLEC相比,采用SKOV-PM4细胞条件培养基交互培养后HLEC形态改变明显,胞浆内出现空泡化超微结构,生长速度稍高HLEC细胞,细胞的运动侵袭能力增强,细胞的成管能力也增强。共培养的绿色荧光标记的SKOV3-PM4细胞-红色荧光标记的HLEC细胞在激光共聚焦显微镜下可见两种细胞的融合现象；明胶酶谱分析显示,基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)在单独的SKOV3-PM4细胞中低表达,在HLEC中不表达,在共培养的SKOV3-PM4-HLEC中高表达。结论：交互培养、共培养后SKOV3-PM4、HLEC细胞与单独培养的SKOV3-PM4、 HLEC相比细胞的形态超微结构发生明显的改变,细胞增殖、侵袭、迁移、运动能力均增强,推测这些生物学特性发生改变可能与细胞生长的微环境及细胞间相互作用途径有关。第四章应用二维电泳和质谱技术筛选卵巢癌淋巴结定向转移细胞上清液中分泌蛋白质的差异性的初步研究目的：通过分离并鉴定卵巢癌淋巴结定向转移细胞系分泌蛋白的差异性,以发现分泌蛋白在肿瘤侵袭迁移过程中的作用。方法：收集卵巢癌(SKOV3)、卵巢癌淋巴结定向高转移细胞(SKOV3-PM4)的无血清培养液中的蛋白,用双向电泳分离细胞上清液中的蛋白进行比较。选择在SKOV3-PM4上清液中明显差异表达的蛋白点,用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)质谱分析。结果：对筛选出的在SKOV3-PM4细胞上清液中明显差异表达的20个蛋白点,共有7个蛋白点被成功鉴定,其中在SKOV3-PM4细胞上清液中高表达的为5个,低表达2个。结论:SKOV3-PM4相对于SKOV3细胞上清液中蛋白存在明显的差异,差异蛋白与肿瘤的侵袭迁移过程相关